Electroforesis laboratorio clinico bioquimica medicina PDF

Preview

Summary

electroforesis
laboratorio clinico
bioquimica
medicina
ciencias de la salud...

Description

ELECTROFORESIS 1.- Es el movimiento de una partícula cargada bajo la acción de un campo eléctrico +

repelen

+

atraen

-

Es un técnica de separación de sustancias que fue introducido en 1937 por le químico Arme Tiselius quien ganó el premio nobel en 1948. Frente móvil fue el termino con el cual se le conocía a la ahora llamada electroforesis. Dato: ácidos nucleicos solo poseen carga – debido a los fosfatos que posee en su estructura por ellos en una electroforesis migran al polo positivo (ánodo), por el contrario con las proteínas que poseen + y – En definición podemos decir que la electroforesis consiste en la migración proporcional de las moléculas a través de un gel u otra matriz porosa. Elementos 1.

2.-

CAMARA DE ELECTROFORESIS: permite la generación de un campo eléctrico alrededor de un gel donde se depositan las muestras. El alto contenido de electrolitos que presenta permite la transmisión de la corriente eléctrica lo que mantendrá el ph estable al peso de la corriente. GEL: La muestra debe de colocarse sobre un medio de soporte con la finalidad de evitar perturbaciones mecánicas durante la separación. *gel de agarosa: polisacárido que se extrae de las algas ,arinas que a T ambiente se mantiene sólida pero se disuelve en una T de 50 a 60 C. +gel de acrilamida: polímero sintético con el cual se puede generar intevalos de tamaño de poro

3.BUFFER DE CORRIMIENTO: es la misma composición y ph que el buffer con el que se prepara el gel, esto proporciona el medio para la transmisión de corriente y mantiene el ph estable. 4.-

MARCADOR DE PESO MOLECULAR: permite determinar el tamaño de los fragmentos de ácidos nucleicos o proteínas contenidas en la muestra

5.BUFFER DE CARGA: es un amortiguador que nos brinda peso, densidad y color a la muestra, también nos permite el corrimiento de la muestra en el gel.

TIPOS DE ELECTROFORESIS: E. horizontal .- se lleva a cabo con el gel de agarosa para acidos nucleicos E. vertical .- solo se lleva a cabo con el gel de poliacrilamida, se utiliza para acidos nucleicos o proteinas de menor tamaño, aquí la corriente electrica se genera gracias al buffer en el que se encuentra el gel. E. en acidos nucleicos E. de proteinas PROCEDIMIENTO: 1..- Preparar un gel de agarosa o acrilamida a la concentración requerida 2.- Mezclar las muestras a analizar con un buffer de carga adecuado. 3.- Cargar las muestras en gel 4.- Realizar la corrida electroforética al voltaje pertinente. 5.- Visualizar los acicios nucleicos. FACTORES: ….. APLICACIONES: Usos para la electroforesis para acidos nucleicos en gel de agarrosa son : Determinar los tamaños moleculares Analizar los fragmentos cortados con enzimas Comparar los diferentes fragmentos de ADN Aislar o recuperar los fragmentos de ADN Analizar productos de PCR EJEMPLO: ………...