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INFORME EXTRACCIÓN ADN DE CEBOLLA MARÍA JOSÉ SÁNCHEZ RODRÍGUEZ CÓDIGO: 121004540 RESUMEN: En la práctica a continuación, se extrajo, purificó y analizó el ADN vegetal del centro de una cebolla a partir de una serie de procedimientos, en los cuales se licuó la cebolla y se expuso a una serie de pruebas específicas y sustancias tales como: solución de lisis (rompiendo su membrana celular), etanol, difenilamina (visualizando la estructura fibrilar del ADN) y se identificó la presencia del grupo fosfato a partir de la reacción con ácido molibdico y ácido ascórbico. Para finalizar, se expuso el precipitado a baja y alta temperatura para así evidenciar el cambio en su viscosidad. PALABRAS CLAVE: ADN, extraer, estructura fibrilar, membrana celular, grupo fosfato, viscosidad, purificar, estructura.

MARCO TEÓRICO: Los ácidos nucleicos son biomoléculas portadoras de la información genética. Son biopolímeros, de elevado peso molecular, formados por otras subunidades estructurales o monómeros denominados Nucleótidos. Son formados por la repetición de nucleótidos unidos mediante enlaces fosfodiéster.

Ilustración 1 Ácidos Nucleicos

Los ácidos nucleicos contienen toda la información acerca del genoma de los organismos. Tienen diferente y específica localización subcelular. Son fundamentales para la vida de los organismos. Hay dos tipos de ácidos nucleicos atendiendo a su estructura y composición: Ácido desoxirribonucleico o ADN: almacenan, conservan transmiten la información genética de información genética del ADN de células madres a células hijas. Codifica la información que la célula necesita para fabricar proteínas. Contiene toda la información genética hereditaria que sirve para desarrollarnos, vivir y reproducirnos.

Se encuentra en el núcleo de las células, aunque una pequeña parte se encuentra en las mitocondrias. Está compuesto por estructuras más simples, las bases nitrogenadas (compuestos orgánicos cíclicos que incluyen dos o más átomos de hidrógeno): Adenina, guanina, citosina y timina. El orden que adoptan estás bases determina nuestro código genético.

mensajeros y catalizan la síntesis de proteínas.

Ilustración 3 Estructura del ARN

Ilustración 2 Estructura del ADN

Ácido ribonucleico o ARN: articula los procesos de expresión de la información genética del ADN en la síntesis de proteínas. Es el otro tipo de ácidos nucleicos que posibilita la síntesis de proteínas. Si bien el ADN contiene la información genética, el ARN es el que permite que esta sea comprendida por las células. El ARN está compuesto por una cadena simple, al contrario del ADN que tiene una doble cadena. Existen tres tipos de ARN: ARN Mensajero, que transmite la información codificante del ADN sirviendo de pauta a la síntesis de proteínas. ARN de Transferencia, que transporta aminoácidos para la síntesis de las proteínas. ARN Ribosómico, que se localiza en los ribosomas ya ayuda a leer los ARN

El Grupo Fosfato: es una molécula formada por un átomo de fósforo unido a cuatro oxígenos PO43-. Este grupo de átomos se llama grupo fosfato cuanto está unido a una molécula que contenga carbono (cualquier molécula biológica). Se halla en los nucleótidos, tanto en los que forman parte de los ácidos nucleicos, como en los que intervienen en el transporte de energía química.

Ilustración 4 Estructura del Grupo Fosfato.

Resultados: 1. Extracción del ADN: •

Se extrajo 50 mg del centro de la cebolla cortado en pedazos pequeñas

Ilustración 5 Muestra de Cebolla

Luego, en un trituró la cebolla en un triturador, añadiéndole 100 mL de solución de Lisis y se filtró por medio de una gasa

Ilustración 6 Muestra con solución de Lisis triturada

Ilustración 7 Filtración de la muestra.

•

Se transfirió 4 mL del filtrado a un tubo de ensayo y se adicionó 8 mL de etanol al 95% frío, gota a gota sin mezclar. De aquí se formó un precipitado (un tipo de tela blanca).

Ilustración 8 Adición del etanol al filtrado.

•

Ilustración 9 Formación del precipitado.

Se enrolló el precipitado con una varilla de vidrió y se sacó el líquido con ayuda de la pipeta más pequeña.

Ilustración 10 Precipitado sin líquido.

2. Identificación del ADN: •

Se tomó dos tubos de ensayo, en el tubo A se añadió 1 mL de Agua destilada y 2 mL de difenilamina. En el tubo B se añadió 1 mL del precipitado y 2 mL de difenilamina.

Ilustración 11 TUBO B

•

Se pusieron ambos tubos a baño María durante 10 minutos.

Ilustración 12 y 13 Tubos en baño María.

Después de 10 minutos se sacaron los tubos de ensayo del agua caliente y se observó que las muestras se tornaron turbias azuladas. S iendo positiva la identificación.

Ilustración 13 Tubo A y B después del baño María.

Procedimiento ADN: precipitado difenilamina

Coloración + Azulada débil

Resultado Positivo

Tabla 1. IDENTIFICACIÓN DEL ADN

3. Identificación de grupo Fosfato: •

Se tomaron dos tubos de ensayo, en el tubo A se añadió 0,1 mL de Agua destilada, 0,2 mL de ácido molíbdico y 0,5 mL de ácido ascórbico. En el tubo B se agregó 0,1 mL del precipitado, 0,5 mL del ácido molíbdico y 0,5 mL de ácido ascórbico. Se mezcló y dejó actuar por 15 minutos. Luego de haber pasado los 15 minutos, se observó tonalidad verde azulada. Siendo positiva la identificación

Ilustración 14 Tubo A y B con los ácidos. Tubo B con el precipitado

Ilustración 15 Tubo A y B luego de 15 minutos

Procedimiento

Coloración

Resultado

FOSFATOS: Precipitado + ácido molibdico + ácido ascórbico

Verde azulado

positivo

Tabla 2. IDENTIFICACIÓN DE GRUPOS FOSFATOS.

•

Se transfirió el sobrante del filtrado a un beaker y se le adicionó 10 mL de etanol al 95% frio, gota a gota. Nuevamente se observo la formación de precipitado, el cual se enrolló con ayuda de una varilla de vidrio y se puso en un tubo de ensayo limpio. Luego, se le adicionó al tubo 5 mL de agua disolviendo el precipitado, se agitó. Así mismo, se dividió el contenido en dos tubos de ensayo.

Ilustración 14. Disolución del precipitado con agua en tubo A y B

El tubo B se puso en baño María por 10 minutos. • •

•

Se pipeteó 0,2 mL del tubo A y se dejó caer por gravedad, tardó 2 segundos en caer. El contenido restante del tubo A se puso a enfriar en un recipiente con hielo por 15 minutos. Cuando se encontraba frio, se pipeteó 0,2 mL y se dejó caer por gravedad, tardó 5 segundos en caer. Luego de los 10 minutos, se sacó el tubo B. Se pipeteó 0,2 mL de el contenido en temperatura alta y se dejó caer por gravedad, tardó 10 segundos en caer.

TEMPERATURA Ambiente Frío Cálido

TIEMPO DE CAÍDA 2 segundos 5 segundos 10 segundos

Tabla 3. PRUEBA DE VISCOSIDAD Y TIEMPO

ANÁLISIS DE RESULTADOS: 1. Extracción de ADN: Primero, se rompe la pared celular y la membrana plasmática por medio de la fase de licuado y agregando de 10 mL de Lisis, para poder acceder al núcleo de esta. Esto resulta en la ruptura de la membrana y la liberación de los componentes intracelulares. Esto debido a que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN permitiendo la disolución de la célula. Así mismo, para proteger y obtener el ADN se agrega el etanol frio al 95%, haciendo que el ADN se separe de la parte líquida, quedando una tela blanca. 2. Identificación del ADN: Después, en la identificación del ADN en la cebolla, se utilizó Difenilamina (detección de nitratos, cloratos y otros agentes oxidantes) la cual en medio acido toma una coloración azul, coloración la cual es positiva para presencia de ADN. Esto se debe a la hidrólisis que sufre el ADN. 3. Identificación del grupo fosfato: Se usó el ácido molibdico y el ácido ascórbico ya que actúan

como agentes oxido-reductores en las oxidaciones biológicas. El grupo fosfato se identifica por la reacción del fosforo inorgánico en un medio ácido, lo cual da una tonalidad verde azulado, esta tonalidad es positiva para presencia de grupos fosfatos. 4. Viscosidad: La variación de temperatura es un factor influyente en la viscosidad de una sustancia. Cuando una sustancia está a temperatura ambiente, la molécula se mantiene estable. Así mismo, al aumentar la temperatura la molécula se desnaturaliza, pues se rompen los puentes de hidrógeno, formando una separación de su doble hélice. Y al disminuir la temperatura la molécula tiende a estabilizarse (P. Moreno – D. Rueda). Por ende, los resultados a esta prueba de viscosidad no fueron los esperados ya que, al exponer la sustancia a temperatura alta, tardó el doble en descender que, al exponerla a temperatura baja y tardó cinco veces más en caer que estando a temperatura ambiente.

CONCLUSIONES: 1. La solución de lisis nos ayuda romper la membrana celular y acceder al núcleo, así mismo obtener el ADN. 2. Al agregar el etanol a la muestra, queda dividida en dos fases: la acuosa la cual queda en la parte de arriba, que es de donde se desprende el ADN, y en la parte de abajo queta el etanol. 3. Mediante la oxidación-reducción podemos identificar partes de la estructura del ADN como el grupo fosfato. 4. La viscosidad de una sustancia depende de diversos factores, entre esos la temperatura.

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Tividor, Sebastian. (2019). Obtención de ADN de una muestra vegetal. https://www.researchgate.net/publication/332910597_Obtencion_de_ADN_de_una_muestra_ve getal/citation/download Suarez. (2011). Extracción, identificación y reconocimiento http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011-TP-8Extracci%C3%B3n-y-caracterizaci%C3%B3n-de-DNA.pdf Martínez L. (2015) Extracción del ADN. http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart%C3 %ADn2015_4_19P21_19.pdf...