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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD Sección: Genética Humana, Microbiología y Bioquímica Clínica LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

PRÁCTICA N°2. EXÁMEN EN FRESCO Y TINCIONES

INTEGRANTES: Joseph Manuel Muñoz Romero. Darwin Gonzalo Chávez Chávez.

DOCENTE: Dra. Zorayda Toledo B.

LOJA – ECUADOR

2018

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. INTRODUCCIÓN Para el estudio de los microorganismos y bacterias es necesario de técnicas y materiales que nos permitan identificar la naturaleza o tipo de bacteria que se encuentra presente en una determinada muestra. Se requiere de un microscopio óptico y de una preparación especial, ya que, poseen poco contraste con la luz natural y se dificulta su apreciación. Para obtener una buena imagen es indispensable la preparación y la tinción (tratamiento y adición de colorantes a la muestra). Para el correcto estudio de los microorganismos se han establecido dos métodos: el examen en fresco y varios tipos de tinciones. Examen en fresco. Es la forma más sencilla para el examen microscópico de algún espécimen. La preparación en fresco simple consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Este tipo de preparación se utiliza cuando se requiere observar microorganismos vivos, su tamaño, movilidad y forma, etc… El problema radico en que, no permite aumentar el contraste de la preparación y así, lograr distinguir un microorganismo de otro. Tinciones. Los colorantes aumentan el contraste de las células. La mayoría solo son efectivos cuando la muestra ha sido fijada, es decir, estén muertos y adheridos al portaobjetos. •

Tinciones simples. Un colorante, proporciona contraste para observar mejor un organismo.

•

Tinciones diferenciales: Tinción de Gram. Dos o más colorantes; distingue entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.

•

Tinción de ácido-alcohol resistencia (Ziehl-Neelsen): Dos colorantes; distingue entre las micobacterias (ácido-alcohol resistentes) y el resto de las bacterias

•

Tinciones específicas: o

Tinción de esporas de Wirtz-Cortitlin

o

Tinción de flagelos de Leifson

o

Tinción negativa (cápsulas) (CIDTA, 2017)

2. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 2.1 Examen en fresco

Al realizar el examen en fresco se visualizó la presencia de bacterias de forma esférica, por lo que se clasificó como cocos. Solamente se apreció su movilidad. No es posible determinar otras características con este método.

Figura 1. Cocos en un examen en fresco. Objetivo: 100x

2.2 Tinciones: Tinción de Gram

Una ves fijada la muestra y añadida las tinciones correspondientes a la tinción de Gram, se observó cocos de coloración rosado. Esto indica que la composición de la pared celular de las bacterias no permitió una captación completa del colorante. Se clasificó como cocos Gram negativos Figura 2. Cocos Gram negativos Objetivo: 100x

En otra preparación, se observa bacterias con forma cilíndrica, alargada y de coloración azul violácea. Según la morfología y tinción observada (dependiente de la naturaleza de la pared celular) se clasifica como bacilos Gram positivos. Figura 3. Cocos Gram negativos Objetivo: 100x

3. CONCLUSIONES Importancia de la tinción de Gram en el diagnóstico de enfermedades infecciosas por bacterias. La tinción de Gram es una técnica rápida, sencilla y de muy bajo costo, por lo que representa un beneficio significativo para el paciente y el proveedor de salud. Es una técnica que permite el diagnóstico presuntivo, porque mediante la coloración dependiente la naturaleza de la pared celular de las bacterias, nos pueden dar pautas acerca del agente etiológico que está causando la enfermedad. Se debe tener en cuenta la forma de las bacterias y la agrupación que tienen (racimos, cadena). Este examen tiene valor diagnóstico y es de informe inmediato en muestras de líquido cefalorraquídeo y líquidos corporales, esputo, sangre, orina, abscesos, y secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnostico en muestras faríngeas y nasofaríngeas ya que la biota observada hace parte de la flora normal. Es importante porque permite actuar de forma rápida en cuanto a tratamiento oportuno y medidas a tomar en consideración, en pacientes que presenten infecciones en estas zonas estériles, cuyas enfermedades pueden dejar graves secuelas. Por ejemplo: •

La disposición de cocos Grampositivos en cadena indica estreptococos.

•

Diplococos Grampositivos en forma de lanceta o con extremos alargados son característicos de S. pneumoniae cuando se observan en esputos.

•

Bacilos Gram negativos curvos en muestras de heces diarreicas indican especie de Vibrio.

4. BIBLIOGRAFÍA

CIDTA. (2017). Aula virtual del agua. Recuperado el 26 de Mayo de 2018, de Observación de los microorganismos: http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni _02/56/cap304.htm Murray, P., Rosenthal, K., Kobayashi, G., & Pfaller, M. (2013). Microbiología Médica (Séptima ed.). Barcelona: ELSEVIER.

5. FIRMAS

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