PERFIL LIÍDICO: DETERMINACIÓN DE ÍNDICES DE RIESGO METABÓLICO Y DE ATEROGENICIDAD. LÍPIDOS TOTALES, COLESTEROL, TAG, VLDL-c, LDL-c, HD-c. PDF

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PERFIL LIÍDICO: DETERMINACIÓN DE ÍNDICES DE RIESGO METABÓLICO Y DE ATEROGENICIDAD. LÍPIDOS TOTALES, COLESTEROL, TAG, VLDL-c, LDL-c, HD-c.Bioquímica clínica. Semestre 4to- Cuenca- Ecuador -Perfil lipídico - Prácticas De laboratorio....

Description

UNIVERSIDAD DE CUENCA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA LABORATORIO CLÍNICO

MATERIA: BIOQUÍMICA CLÍNICA

SEMESTRE: CUARTO

INTEGRANTES VANNESA QUITO PAOLA SIGUENCIA

DOCENTE: DRA. REINA MACERO

TEMA PERFIL LIÍDICO: DETERMINACIÓN DE ÍNDICES DE RIESGO METABÓLICO Y DE ATEROGENICIDAD. LÍPIDOS TOTALES, COLESTEROL, TAG, VLDL-c, LDL-c, HD-c.

INTRODUCCIÓN Los lípidos son biomoléculas conformadas por carbono, hidrogeno y oxígeno. Algunos lípidos pueden estar constituidos por nitrógeno, fósforo y azufre. Estas biomoléculas se caracterizan por ser insolubles en agua, aunque pueden llegar a ser solubles en sustancias orgánicas como éter, acetona y cloroformo. Poseen funciones esenciales para el funcionamiento del ser humano, esas funciones son el almacenamiento de energía a través de los triacilglicéridos; forman parte de la estructura de las membranas celulares aquí actúan los esfingolípidos, colesterol y los fosfolípidos. Sin olvidar, las otras moléculas lipídicas que son las vitaminas o los diferentes pigmentos.

OBJETIVOS

GENERAL: Aprender la importancia del perfil lipídico dentro del funcionamiento del laboratorio clínico, su relación con la salud y el diagnóstico de diferentes enfermedades. Además, conocer los distintos procedimientos de colesterol total, lipoproteínas e índices de riesgo metabólico y aterogenicidad. ESPECÍFICOS:

1. Reconocer las distintas pruebas del perfil lipídico, su importancia, significación clínica para un diagnóstico certero. 2. Explicar los diferentes procedimientos y valores referenciales del perfil lipídico. 3. Determinar índices de riesgo metabólico y aterogenicidad.

MARCO TEÓRICO

PERFIL LIPÍDICO Son un conjunto de pruebas útiles para valorar la concentración de los distintos lípidos en la sangre, tejidos y órganos del ser humano, su correcto funcionamiento y metabolismo de las grasas. Los niveles altos o bajos definen el estado de la salud de una persona desencadenando alteraciones fisiológicas como enfermedades cardiovasculares, problemas o síndromes metabólicos, dislipidemias y aterosclerosis que es un estrechamiento de las arterias causado por la acumulación de grasas a nivel de las paredes de las mismas. Su importancia e identificación en el laboratorio es fundamental para disminuir o prevenir los riesgos. Dentro del perfil lipídico se determinar las siguientes pruebas[ CITATION Pri21 \l 12298 ]:

COLESTEROL El colesterol es un esteroide que encontramos en la estructura de la membrana en todas las células que conforman el cuerpo. Esté lípido es muy importante para el organismo debido a que cumple con diferentes funciones como: es precursor de hormonas cortico esteroidales (aldoesterona y cortisol) y sexuales, como se mencionó antes, forma parte de la membrana celular y también es impulsor de la vitamina D. sin embargo tener el colesterol elevado puede conducir a que las arterias se obstruyan o estrechen (arterioesclerosis) y puede llevar a tener enfermedades cardíacas (2). -

Colesterol LDL (lipoproteína de baja densidad): transporta el colesterol desde el hígado hacia el resto de los tejidos, se lo conoce como el colesterol malo, debido a que puede que conduce a la acumulación de grasa en las arterias.

-

-

Colesterol HDL (lipoproteína de alta densidad): por el contrario, extrae el colesterol de las arterias y lo transporta hacia el hígado donde se sintetiza y este mismo excreta la bilis Colesterol VLDL (lipoproteína de muy baja densidad): transporta los triglicéridos desde el hígado hacia el resto de los tejidos y también acumula grasa en las bacterias cuando está en exceso (2).

Condiciones del paciente Para realizar una prueba de perfil lipídico es importante darle al paciente ciertas indicaciones para que no afecte los resultados del examen: 1. Se le pide al paciente que no cambie su dieta normal, ya que se va a determinar los valores de la grasa, el paciente suele mejorar su dieta, y los resultados obtenidos no van a reflejar la realidad. 2. Ayunar de 8 a 12 horas. 3. Evitar el estrés antes y después de la extracción de la muestra. 4. Evitar el consumo de alcohol al menos 24 horas antes de la toma de muestra. 5. No debe realizar actividad física antes de la toma de muestra, ya que eso también altera los resultados.

1. COLESTEROL TOTAL El colesterol constituye a la sumatoria de los distintos tipos de colesterol transportada en las lipoproteínas HDL, LDL[ CITATION Pri21 \l 12298 ]. Fundamento Se utiliza el método de determinación de colesterol en suero lo cual se basa en tres enzimas, estas son: colesterol esterasa, colesterol oxidasa y peroxidasa. La mezcla de la peroxidasa con el fenol y 4 aminoantipirina provoca una condensación debido al peróxido de hidrógeno, constituyendo una quinoneimina coloreada que va a ser proporcional a la concentración de colesterol en la muestra (3).

Materiales y Reactivos equipos  Espectrofotómetro  Monoreactivo

Muestras 

Suero

libre

de

  

o colorímetro. Baño maría. Pipetas Tubos de ensayo



Patrón colesterol

del

hemólisis o plasma heparinizado

Interferencias   

Lipemia Hemoglobina Medicamentos

Procedimiento 1. Equilibramos los reactivos y las muestras a una temperatura ambiente. 2. Tomamos 3 tubos y rotulamos (monoreactivo, muestra y estándar) y se prosigue con el pipeteo de la siguiente manera: Monoreactivo Muestra Estándar

B 1ml

M S 1ml 1ml 10u l 10ul

3. Una vez pipeteado dejamos reposar los tubos durante 5 minutos en el baño maría a una temperatura de 37ºC. 4. En el espectrofotómetro se lee la absorbancia y el estándar a 500 nm frente al blanco de reactivo, y se realizan los cálculos (3). Cálculos f=

Concetración Stándar Absorbancia Stándar

Colesterol= Absorbacia de la muestra x factor .

Valores de referencia 240mg/dl

Normal Normal/Alto Alto

Significado clínico El desequilibrio de los niveles de colesterol conlleva a las hiperlipoproteinemias que son desórdenes que afectan a los lípidos séricos, de esta manera causando la enfermedad cardíaca coronaria y arterioesclerosis. También podemos ver en pacientes con ictericia, diabetes, hipotiroidismo y algunas enfermedades renales; tienen el colesterol total esta elevado con una fracción normal de colesterol esterificado, Por otro lado, niveles bajos de colesterol total con tasas normales de colesterol esterificado puede indicar ciertos casos desnutrición (3).

2. COLESTEROL HDL (LIPOPROTEINA DE ALTA DENSIDAD) Significado clínico Las lipoproteínas de alta densidad son fundamentales para analizar e identificar pacientes con alto riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. Participan en el proceso del metabolismo de lípidos, es decir, estas lipoproteínas lo que hacen es captar y conducir el colesterol iniciando por los tejidos periféricos hasta llegar al hígado. (mecanismo cardioprotectivo). Una de sus funciones es eliminar el colesterol que se encuentran en las arterias (4). Fundamento Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrán de PM 50.000 en presencia de iones Mg++. En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa con colorimetría según Trinder (4). Materiales y equipos  Pipetas.  Tubos  Centrífuga  Baño María  Espectrofotómetro

Reactivos    

Muestras

Reactivo Suero o plasma precipitante Estándar del colesterol Reactivo de trabajo Sobrenadante límpido

Interferencias   

Bilirrubina Hemoglobina Medicamentos

Procedimiento 1. Añadir en un tubo de Kahn lo siguiente: Muest ra 500 ml

Reactivo precipitante 50 ul

2. Se procede a homogenizar durante 20 segundos y dejar a 4-10°c

en la refrigeradora/baño de agua (30-40 min)[ CITATION Wie21 \l 12298 ] 3. Centrifugar 3000 r.p.m (15 min) [ CITATION Wie21 \l 12298 ] 4. Una vez centrifugado, se debe usar sobrenadante límpido[ CITATION Wie21 \l 12298 ]. 5. Rotular 3 tubos (Blanco, estándar y desconocido) y colocar lo siguiente[ CITATION Wie21 \l 12298 ]: B Estándar

S D 20u l 2ml 2ml

Reactivo de 2ml trabajo Sobrenadante 100 ul límpido 6. Homogenizar e incubar a 37°C (5 min). En caso que se llegue a utiliza el reactivo de trabajo de colestat enzimatco (AA/líquida) se debe esperar 15 min [ CITATION Wie21 \l 12298 ] 7. Posterior a esto se quita del baño y se pone a enfriar[ CITATION Wie21 \l 12298 ]. 8. Finalmente, leer en el espectrofotómetro en una absorbancia de 505 nm. No olvidar que hay que poner a cero el espectrofotómetro con el blanco[ CITATION Wie21 \l 12298 ]. Fórmula f=

Concetración HDL Absorbancia Stándar

HDLColesterol=desconocido x factor . Valores referenciales Hombres

>55mg/dl 35-55mg/dl 65mg/dl 45-65mg/dl 10 mg/dL), Hemoglobina (> 5 g/L). Medicamentos.

Procedimiento Muestra: Suero. Para su recolección se recomienda que el paciente este en ayunas previo al examen entre 12-16 horas (5). 1. Añadir en un tubo de Kahn lo siguiente (5): Muestra

2. 3. 4. 5. 6.

Reactivo (A) 200 ul 100 ul Se procede a homogenizar durante 20 segundos y dejar en baño maría (20-25°C) en un periodo de 15 minutos (5). Centrifugar 3000 r.p.m (15 min) Separar el sobrenadante (5). El sobrenadante se utilizará para realizar el procedimiento colorimétrico (5). Rotular 3 tubos (Blanco, estándar y desconocido) y colocar lo siguiente (5). B Estándar Reactivo de 2ml trabajo Sobrenadant e

S 20 ul 2ml

D 2ml 100 ul

7. Homogenizar e incubar a 37°C (5 min). En caso que se llegue a utiliza el reactivo de trabajo de colestat enzimatco (AA/líquida) se debe esperar 15 min; reactivo de colestat enzimático se deberá quitar del baño y ponerlo a enfriar (5). 8. Por último, se procede a realizar la lectura en el espectrofotómetro a una absorbancia de 505 nm. (se recomienda de cero de absorbancia con el tubo rotulado como blanco) (5). Fórmula

f=

Concetración LDL Absorbancia Stándar

LDL=Colesterol total ( ¿ )−(desconocido x factor )

Valores referenciales: Riesgo Bajo

< 100 mg/dL 100- 159 mg/dl 160-189 mg/dl

Riesgo moderado Riesgo Alto >190 mg/dl Riesgo Muy alto 4. COLESTEROL VLDL (LIPOPROTEÍNA DE MUY BAJA DENSIDAD) Significación clínica La VLDL es una lipoproteína con una densidad muy baja. Los quilomicrones junto con VLDL se caracterizan por transportar grandes cantidades de triglicéridos. Esta lipoproteína funciona a partir del hígado, el cual genera colesterol VLDL y lo envía hacia la circulación sanguínea donde va malgastando triglicéridos hasta transformarse en LDL. Según varias guías de la sociedad europea de cardiología, menciona y afirma que hay una relación muy estrecha entre la función de la lipoproteína VLDL con la aterogénesis (6,7). La aterogénesis se conoce por la formación de placas en las paredes de las arterias sanguíneas, generando un flujo anormal de la sangre a través de los vasos sanguíneos. Esta alteración produce grave problemas en la salud como (6,7): -

riesgo de infarto agudo (miocardio) (6,7). accidente vascular cerebral (6,7).

Fórmula

VLDL=

Triglicéridos 5

Valores referenciales: Su valor normal es 2 - 30 mg/dL (6,7).

ÍNDICE DE ATEROGENICIDAD Se denomina también como “índice de Castelli”. Su función es reducir o prevenir el riesgo de padecer problemas del corazón. En otras palabras, analiza el estado de las arterias debido a que por medio de la alimentación puede haber una acumulación de grasa, valorando si hay o no obstrucción. Es un índice sensible y más certero a la hora de diagnosticar riesgos cardiovasculares y también en casos de síndromes metabólicos (8,9). Significación clínica La aterosclerosis, no es nada más que una alteración a nivel vascular que puede ser controlada, en el caso de que no sea así, el paciente puede fallecer. Esta alteración es causada por la aparición de colesterol en las paredes de las arterias, disminuyendo el paso de la sangre y produciendo una obstrucción que a su vez puede genera un endurecimiento y escasa flexibilidad de las paredes de las arterias originando el riesgo de hemorragias o destrucción de los vasos sanguíneos (8,9). Esta patología puede desencadenar a que el paciente presente hemorragias, trombosis, riesgos cardiovasculares, alteraciones a nivel del riñón, cerebro o el hígado (apoptosis)[ CITATION índ21 \l 12298 \m DIA21]. Factores que interviene: -

sedentarismo (8,9). diabetes (8,9). obesidad (8,9). tabaquismo (8,9). malos hábitos alimenticios (8,9). Hipertensión (8,9).

Como se mencionó es una alteración que se puede prevenir con la disminución del colesterol (malo) o el aumento del colesterol (bueno) (8,9).

Fórmula Está constituido por: -

La presencia de una variable lipídica que es el colesterol total o el mismo LDL que tiene una tendencia positiva a problemas cardiovasculares (8,9).

-

La presencia de HDL como una tendencia negativa (8,9). Índice de aterogicidad=

-

Colesterol total Colesterol HDL

Valor mayor = mayor riesgo (relacionado con el aumento ya sea del numerador o disminución del denominador o incluso puede ser ambos.) (8,9).

Valores referenciales

Riesgo bajo Riesgo moderado

Riesgo alto

Mujer Hombr es es < 4,5% 7% >9%

TRIGLICÉRIDOS Son conocidos como la grasa acumulada del cuerpo. A pesar de tener importantes funciones como brindar calorías lo que ayuda a obtener energía; en niveles elevados promueve a la arterioesclerosis y enfermedades cardíacas Tienen la función de almacenar las calorías no utilizadas proporcionando energía al cuerpo. Sin embargo, tener un nivel alto de triglicéridos promueve al aumento de enfermedades cardíacas (2). Fundamento Se usa el método de la hidrólisis enzimática de los triglicéridos séricos a glicerol y ácidos grasos libres por acción de la lipoproteína lipasa. El adenosin trifosfato (ATP) en presencia de glicerolquinasa fosforila al glicerol formando glicerol-3-fosfato y adenosin difosfato (ADP). La enzima glicerofosfato oxidasa oxida al glicerol-3-fosfato glicerol-3-fosfato y peróxido de hidrógeno. Cuando se mezclan con la peroxidasa, el fenol y la 4-aminoantipirina debido al peróxido de hidrógeno se condensan y forman un cromógeno rojo que es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la muestra (10). Materiales

y Reactivos

Muestras

equipos  Espectrofotómetro o colorímetro.  Baño maría.  Pipetas  Tubos de ensayo

 

Monoreactivo Estándar colesterol

Suero o plasma del

Interferencias   

Lipemia Hemoglobina Medicamentos

Procedimiento 1. Se debe equilibrar los reactivos y las muestras a una temperatura ambiente. 2. Se rotula los 3 tubos (monoreactivo, muestra y estándar) y se prosigue con el pipeteo de la siguiente manera: Monoreactivo Muestra

B 1ml

Estándar

M S 1ml 1ml 10u l 10ul

3. Una vez que se ha pipeteado se deja reposar los tubos a una temperatura ambiente durante 15 minutos o 5 minutos en el baño maría a una temperatura de 37ºC. 4. En el espectrofotómetro se lee la absorbancia y el patrón a 500 nm frente al blanco de reactivo, y se prosigue a los cálculos (10). Cálculos f=

Concetración Stándar Absorbancia Stándar

TAG=Absorbacia de la muestra x factor .

Valores de referencia 500 mg/dl

Muy alto

Significado clínico Los triglicéridos son lipoproteínas y el desequilibrio de los niveles de lipoproteínas plasmáticas lleva a una hiperlipoproteinemia, que conduce a la enfermedad cardíaca coronaria y arterioesclerosis. También se encuentran elevados en diabetes, hipotiroidismo y el síndrome metabólico En cambio, los valores bajos de triglicéridos suelen encontrarse en desnutrición y síndrome de la mala absorción (10).

LÍPIDOS TOTALES Fundamento Los lípidos que son insaturados van a reaccionar con el H2SO4 cuando está caliente, esto da paso a la formación de iones carbono. Luego, los iones, frente fosfovainillina, tornan un color rosado. La intensidad de este color va a ser proporcional a la concentración de lípidos totales que se encuentren en la muestra (11). Materiales y Reactivos Muestras equipos  R (Fosfovainillina,  Suero o plasma.  Pipetas  Tubos de ensayo Ácido fosfórico)  Espectrofotómetr  TOTAL LIPIDS CAL o (estándar primario  Baño maría acuoso de Lípidos Totales 750 mg/dL) Procedimiento 1. Ajustamos a 0 el espesctrofotómetro con agua destilada a 520 nm. 2. Pipeteamos en tubos rotulados las siguientes cantidades:

SO4H2 Standar

S 2,5 ml 100 ul

M 2,5 ml

Muestra

100 ul

3. Se mezcla el contenido de los tubos. 4. Incubamos los tubos en un Baño María a 100 °C durante 10 minutos. 5. Colocamos los tubos en un baño de agua fría. 6. Colocamos en tres cubetas las siguientes cantidades: Reactivo Muestra hidrolizada Standar hidrolizado

B 1ml

S M 1ml 1ml 50ul 50u l

7. Mezclamos las muestras. 8. Procedemos a incubar a 37 °C por 15 minutos. 9. Con ayuda del espectrofotómetro, leemos la absorbancia del estándar y de la muestra obtenida, frente al blanco de reactivo. (11) Cálculos A . Muestra−A . Blanco ∗750(Concentración del Standar) A . Standar−A . Blanco

Valores de Referencia Normal: 450-800mg/dl Significado Clínico Los lípidos actúan como fuente de energía de reserva, nos brinda protección para órganos internos, provee compuestos para formar ciertas hormonas, etc. Pero en niveles altos suelo provocar arteriosclerosis e hiperlipemia. Incluso se encuentra en pacientes con diabetes y enfermedades del corazón (11).

RIESGO METABÓLICO

Se refiere al conjunto de factores de presentar ciertas enfermedades crónicas como: la diabetes, enfermedades cardíacas, hipertensión, entre otros. Para decir que una persona tiene riesgo metabólico debe que presentar al menos 3 de los 5 factores de riesgo, esos son: 

  



Presentar obesidad abdominal (cuerpo forma de manzana), lo que significa presentar más de 35 pulgadas en las mujeres y 40 pulgadas en los hombres; presentar una considerable cantidad de grasa alrededor de la cintura puede conllevar a enfermedades cardíacas, antes que la acumulación de grasa en otras áreas del cuerpo. Tener niveles elevados de TGA >150 mg/dL. Bajos niveles de HDL (...