Practica 1, uso de la microscopio PDF

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PRACTICA # 1: USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Introducción El Microscopio es un instrumento que permite observar objetos demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. En general la microscopia se utiliza en microbiología con dos propósitos básicos: la detección inicial de microorganismos y la identificación premilinar o definitiva de los mismos. Los componentes básico de los microscopios ópticos consiste en una fuente de luz que se utiliza para iluminar la muestra colocada en un portaobjetos, un condensador que se emplea para enfocar la luz sobre la muestra y dos sistemas de lente (objetivos y oculares) que se usan para aumentar la imagen de la muestra. El aumento total de la imagen es el producto de los aumentos logrados entre las lentes del objetivo y ocular, habitualmente se utilizan 3 lentes diferentes: de bajo aumento (10x), las cuales se pueden utilizar para obtener una visión general de la muestra, de alto aumento en seco (40x), las cuales se emplean para detectar microorganismos de gran tamaño como parasitos y hongos filamentosos, y de inmersión en aceite (100x) las cuales se usan para observar bacterias, levaduras y detalles morfológicos de los microorganismos y células mas grandes. Las lentes oculares pueden aumentar a mayor medida las imágenes (entre 10 a 15 veces) Objetivo Conocer y relacionarse con el uso del microscopio óptico, y con las morfologías de microorganismos en preparaciones fijas. Materiales y Métodos Materiales: Microscopio óptico Laminillas preparadas Aceite de inmersión Método: Cuidado del microscopio 1. Recibir y posicionar el microscopio de manera adecuada 2. Limpiar las partes mecánicas y oculares del microscopio con un paño (que no deje pelusa) limpio y seco. 3. Identificar cada uno de los componentes del microscopio. Calcular el total de amplificación que se puede obtener con los diferentes objetivos. Aumento del objetivo x Aumento del ocular 10x -> 100x

40x-> 400x 100x -> 1000x

Calcular el aumento útil de los diferentes objetivos. el máximo aumento útil que se puede conseguir con un microscopio óptico está alrededor de 1500x. el

poder máximo de resolución del microscopio óptico es de aproximadamente 0.2 micras esta resolución permite permite la obtención de imágenes adecuadas con aumentos hasta 1000 a 1500 veces Enfoque de la preparación 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Alinear objetico de menos aumento Colocar la preparación sobre la platina Subir la platina mediante el tornillo macrométrico Observando a través de los oculares ajustar diafragma y condensador para obtener iluminación adecuada Afinar el enfoque utilizando tornillo micrométrico Una vez enfocado, girar el revólver y alinear el objetivo 40x Observar por el ocular y verificar que la imagen permanece enfocada y si es necesario enfocar Girar revólver en posición media entre los objetivos 40x y 100x para agregar aceite de inmersión Alinear objetivo y observar la preparación, enfocar si es necesario Resultados

Tuberculosis 100x

Foliculo piloso 40x

Cerebro 10x

Nefritis 100x

Eberthella ty

Discusiones Tuberculosis 100x En esta laminilla preparada se observa una baciloscopia positiva; varias bacterias de importancia medica con una morfología en forma alargada a la cual se le llaman bacilos, de color rojo, con un contraste de fondo azul, la tinción en uso es la de Ziehl-Neelsen, esta bacteria lleva por nombre Mycobacterium tuberculosis, la cual ocasiona la enfermedad infecto-contagiosa de la tuberculosis Nefritis crónica con inflamación en conductos renales 40x En esta preparación se observa un corte histológico de riñon en la cual se observan una inflamación en los conductos renales, una gran acumulación de neutrófilos y basófilos los cuales son los encargados de dar esa reacción de inflamación, con una coloración rosa y morado según las propias características de las células. Folículo piloso 40x En esta laminilla se observó con el objetivo de 40x, un corte del folículo piloso, observándose las diferentes partes que lo constituye, el bulbo piloso que es donde tiene origen el pelo, y una parte de este que sale del bulbo piloso, se tiñe de un color café y el bulbo piloso de un color entre morado y rosa. Eberthella typhi 40x En esta preparación se trató de observar el agente patógeno de la tifus, pero debido al tiempo que tiene la preparación, al equipo le fue imposible lograr un enfoque adecuado de este patógeno. Cerebro 10x En este corte histológico se puede visualizar una población celular neuronal abundante heterogénea tanto los somas neuronales, como elementos celulares más pequeños generalmente correspondientes a células gliales. Dichas células se pueden visualizar en forma de pequeños puntos de color café obscuro contrastadas en un fondo de color amarillo por la tinción usada. Sangre periférica 100x En esta preparación se observaron diferentes células que circulan normalmente por sangre, se observó unas pequeñas células sin núcleo, teñidas de un color entre rosa y rojo las cuales llevan por nombre eritrocito. Así mismo se observaron células más grande polimorfonucleadas que corresponden a células de defensa del cuerpo, leucocitos, por ultimas se podían visualizar pequeños fragmentos de células sin forma específica que corresponden a las plaquetas. Conclusiones Tras la práctica del uso del microscopio se conocieron las partes de este y como hacer un uso adecuado de él, para así visualizar las preparaciones fijas de

diferentes tejidos de la manera más correcta y así obtener una buena imagen al observar al microscopio. Discusión de resultados 1. ¿Cuál es la importancia del uso del microscopio en el laboratorio de microbiología experimental? Su importancia radica en la observación de microorganismos que a simple vista no podemos ver y que son los causantes de muchas enfermedades infectocontagiosas, asi mismo gracias a la identificación de estos microrganismos se pueden determinar una acción especifica contra este para ayudar al ser humano a mantenerse sano. 2. ¿Cuál es la principal diferencia entre un microscopio electrónico (SEM/TEM) y un microscopio óptico? Puedes usar diagrama. El microscopio optico -Utiliza un sistema de lentes para aumentar el tamanio del especimen. -Su poder maximo de aumento es de 1000X El microscopio electrónico : -Utiliza haces de electrones para producir la imagen aumentada ,hay de dos tipos: de barrido y de tramision -Los aumnetos que puede dar sonmucho mayores y estamos hablando en el orden de 10 a la 12 -Sin embargo necesita entrenamiento especializado y es muy costoso 3. ¿La preparación de una muestra para ser observada por este tipo de microscopía óptica es igual a la SEM o TEM? En general, la preparación de estas muestras siempre sigue el mismo protocolo básico: fijación química, lavado, deshidratación en series de concentraciones crecientes de alcohol o acetona, inclusión en resina y polimerización. Según el objetivo perseguido, en alguno de estos pasos se incluye una etapa de tinción con metales pesados, tales como el osmio, el wolframio o el uranio. En todo caso, este trabajo lo realiza el usuario en su laboratorio. La siguiente etapa consiste en obtener cortes muy finos del material polimerizado. Para ello se utiliza un ultramicrotomo que sí está disponible en el Servicio.

4. ¿Cuáles crees que sean los errores más comunes que cometen, los alumnos en clase, al manipular el microscopio? El mal manejo de este a la hora de transportarlo, la querer observar la muestra muchas veces en vez de levantarlo, arrastran el microscopio; la limpieza nula que se le da antes y después de observar las preparaciones en especial cuando se usa aceite de inmersión, muchas de las veces los estudiantes no apagan el microscopio antes de desconectarlo, aumentando la posibilidad de que este se dañe. Bibliografía Microbiología Medica, sexta edición. Patrick Murray Histología básica, sexta edición. Luis C. Junqueira, Jose Carnerio...