Práctica 4. Determinación DE Grupo Sanguíneo PDF

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DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO...

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PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO Objetivos 1. Conocer los fundamentos inmunológicos de la reacción antígeno-anticuerpo en la determinación de grupos sanguíneos 2. Conocer los principios de aplicabilidad de la determinación de grupos sanguíneos en la medicina transfusional 3. Determinar grupos sanguíneos problema y resolver el caso clínico adecuadamente. Introducción Se tienen registros de que un obstetra británico llamado James Blundell realizo en 1818 la primera transfusión de humano a humano que se haya registrado, la paciente era una mujer que estaba sufriendo una hemorragia postparto; el doctor obtuvo sangre del esposo y usó una jeringa para transferírsela a su esposa, además de esa, hizo otras 10 transfusiones, la mitad de ellas con éxito y la otra mitad con malos resultados, las que docuemento en The Lancet publicada en 1828 “Experiments on the Transfusion of Blood by the Syringe, Medico-Chirurgical Transactions” Describe la incompatibilidad sanguínea en una paciente que desarrolla fiebre, dolor lumbar y orina oscura; signos y sintomas reconocidos en la actualidad como reacciones transfusionales hemolíticas, representan hoy en día importante causa de morbimortalidad. Como en todas las intervenciones médicas, los riesgos y beneficios deben considerarse cuidadosamente, las transfusiones de componentes sanguíneos con llevan riesgos, son costosas y el sumnistro de sangre es limitado. La transfusión con sangre incompatible tiene grandes riesgos y aun pequeñas cantidades pueden ser fatales bajo ciertas condiciones. La destrucción de glóbulos rojos a nivel intravascular es inmediata conduce a falla renal, ocasionando coagulación intravascular diseminada, y muerte; la incompatibilidad surge porque no todos los glóbulos rojos son iguales, Landsteiner en 1901, observó que los eritrocitos humanos eran aglutinados cuando se ponían en contacto con sueros humanos, actualmente sabemos que los eritrocitos o glóbulos rojos poseen en su membrana glucoproteínas que se conocen como antígenos de superficie. Los antígenos son sustancias capaces de despertar una respuesta inmunológica cuando son inoculados en un ser vivo. Una de las respuestas inmunológicas más importantes es la formación de anticuerpos. Los anticuerpos son proteínas que reconocen con gran especificidad al antígeno que le dio origen. Existen dos tipos de antígenos de superficie: A y B que determinan el grupo sanguíneo. Las personas con grupo sanguíneo A tienen en la membrana eritrocitarias el antígeno A y en el plasma anticuerpos anti-B, las personas de grupo sanguíneo B poseen el antígeno B y anticuerpos anti –A y el grupo sanguíneo O carece de ambos antígenos y presenta anticuerpos anti –A y anti-B. Existe un cuarto grupo sanguíneo el AB, cuyos eritrocitos tienen ambos antígenos y no tiene anticuerpos contra ellos.

En el año 1940, se detectó la existencia de un nuevo antígeno en la membrana de los eritrocitos de la mayoría de la población. Este nuevo antígeno fue denominado con las iniciales Rh, ya que fue identificado por primera vez en la superficie de los glóbulos rojos del simio Macaccus Rhessus. Se denominan Rh positivos a las personas cuyos glóbulos rojos son aglutinados por este anticuerpo y tienen, por tanto, el antígeno Rh en su superficie. Se denominan Rh negativos los que no son aglutinados y que, por tanto, no poseen el antígeno Rh en su superficie. Al suero que se utiliza para su determinación se le llama suero anti –D, Actualmente la ISBT (International Society of Blood Transfusion) reconoce 36 grupos sanguíneos diferentes al AB0 con más de 700 antígenos (ejemplo M, N, S, P, Kell, Duffy, etc.), los sistemas más estudiados en los pacientes son el sistema ABO y el sistema Rh. Principio Los antígenos del sistema ABO se detectan entre los eritrocitos entre la quinta y sexta semana del embrión y no se desarrollan completamente hasta después del nacimiento, durante el crecimiento de van adicionando azúcares

terminales sobre la cadena de oligosacáridos en la membrana de los eritrocitos dando origen a cada uno de los antígenos de forma específica siendo hasta los 2 y 4 años de edad cuando los antígenos A y B están completamente desarrollados y permanecen constantes durante toda la vida. Genéticamente, hay 3 genes que controlan la expresión de los antígenos ABO éstos y su síntesis de ilustra en el siguiente esquema:

Para la determinación práctica del grupo sanguíneo se utilizan sueros que poseen anticuerpos en contra de los antígenos de superficie mencionados. Estos sueros se obtienen mediante la inoculación de un ser vivo con eritrocitos de un tipo sanguíneo específico. Después de seguir un esquema de inoculación apropiado, el organismo desarrolla anticuerpos en contra del antígeno inoculado. Finalmente, se extrae un volumen determinado de sangre y se obtiene el suero con los anticuerpos deseados. En la siguiente tabla se muestra el antígeno de cada grupo sanguíneo y el patrón de reacción con los sueros. Reacción de Aglutinación, Determinación de grupo sanguíneo y Rh

Muestras y Reactivos biológicos 4 muestras sanguíneas de sangre total sin anticoagulante Suero Anti-A Suero Anti-B Suero Anti-AB Suero Anti-D Células sanguíneas A1, A2, B y O Materiales y Equipo

Guantes de látex Tubos de vidrio de 12 x 75 mm Gradillas para tubos Pipetas Pasteur Micropipeta automática y puntas desechables. Solución salina Isotónica Centrífuga Vortex* Plumón indeleble Procedimiento PRECAUCIÓN: • La sangre es un fluido biológico que debe considerarse potencialmente infeccioso, hasta no demostrar lo contrario, por lo que debe manipularse con guantes de látex y teniendo extremo cuidado en su manejo. Determinación de Grupo sanguíneo y Rh 1. Proceder a centrifugar la muestra de sangre total por 5 minutos a 3000 r.p.m. a fin de separar las partes formes del suero: Tenga precaución de balancear la centrífuga con otro tubo con el mismo volumen que el tubo de la muestra

2. Preparar su gradilla con 4 hileras de 9 tubos cada una, marcándolos según la tabla siguiente y dispense una gota de cada reactivo en cada tubo según corresponda procurando homogenizarlos con inversiones suaves del frasco (o con el vortex a baja revolución), sobre todo en el caso de las células; en el tubo marcado como dilución, coloque 2 mL de solución salina isotónica

Muestra

Dilución al 2%

AntiA

AntiAB

AntiB

Células A1

Células A2

Células B

Células O

Anti D

3. Retire la muestra de la centrífuga, destápela cuidadosamente y con ayuda de la pipeta Pasteur dispense cuidadosamente una gota del suero de la muestra en cada tubo marcado como Células A1, A2, B y O.

4. Con ayuda de la micropipeta automática, tomar 100µL de la parte inferior del tubo de la muestra (Fase celular) y mezclarla con el tubo de la dilución, una vez realizada, con la ayuda de la pipeta Pasteur dispensa una gota de la dilución en las posiciones donde se encuentran los sueros:

5. Completada la dispensación de la muestra (suero de la muestra en las células y Células diluidas de la muestra en los antisueros) agítalas suavemente y centrifúgalas nuevamente y de manera ordenada por 30 segundos, al finalizar la centrifugación observa los grados de aglutinación y registra los resultados tubo por tubo. Interpretación de Resultados

Preguntas Caso clínico: Mateo tiene 25 años y es repartidor de pizzas, durante su última entrega ha sufrido un accidente de tránsito con traumatismo craneoencefálico grado III y semi amputación del miembro torácico derecho. Se ingresa a urgencias con escala de Glasgow de 9 y sangrado activo donde se estabiliza y es preparado para cirugía neurológica urgente, se envía una sanguínea al servicio de transfusiones y una requisición por 3 paquetes globulares (concentrado de eritrocitos), dos plasmas frescos y una unidad de plaqueta, conteste: 1. El químico del servicio de transfusiones realiza grupo directo de la muestra y l o tipifica como grupo “A” Rh (positivo), ¿Qué opciones transfusionales tiene este paciente para la transfusión de paquetes globulares y plasmas frescos? 2. La cirugía termina sin incidentes, sin embargo, cuando ya está en el piso de terapia intensiva y durante la infusión de un concentrado de eritrocitos, la enfermera reporta aumento de la temperatura corporal en 1°C acompañada de escalofríos, cefalea, vómitos, aumento de la frecuencia cardiaca y la presión arterial. ¿Cómo se clasifican las reacciones transfusionales según el tiempo de aparición y origen? 3. ¿Como clasificaría la reacción transfusional presentada en este paciente y cuál sería la causa más probable? 4. ¿Cuáles son las indicaciones clínicas que justifican la transfusión de cada uno de los hemocomponentes solicitados? Dr. Antonio Salas Dra. Rita C. Gutiérrez Hdz....