Preparación, Vaciado DE AGAR Bacteriológico EN Cajas Petri Y Siembra POR EL Método DE Estría Doble PDF

Preview

Summary

Preparación de Agar Bacteriologico...

Description

Ingeniería en Industria Alimentarias 2-501

PREPARACIÓN, VACIADO DE AGAR BACTERIOLÓGICO EN CAJAS PETRI Y SIEMBRA POR EL MÉTODO DE ESTRÍA DOBLE. Cienjuegos Hernández Itzel Microbiología de alimentos PROFESOR: M. en C. Domínguez Guadarrama Andrés Alfonso Tecnológico de Estudios Superiores de Villa Guerrero Carretera Federal Toluca-Ixtapan de la Sal lm 64.5, La Finca Villa Guerrero, Estado de México. 1. RESUMEN El agar bacteriológico es un agente de solidificación para su uso en la preparación de medios de cultivo microbiológicos en un entorno de laboratorio. El agar bacteriológico no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en humanos. Para llevar a cabo la siembra de bacterias, se utilizó agua peptonada para diluir y enriquecer la muestra problema y así obtener resultados con mayor eficacia. Sin embrago los resultados no fueron los esperados ya que no hubo crecimiento de colonias. Pero si de otros microorganismos por contaminación. Palabras Clave: Siembra de microorganismos, agar, medio de cultivo SUMMARY Bacteriological agar is a solidifying agent for use in the preparation of microbiological culture media in a laboratory environment. Bacteriological agar is not intended to be used in the diagnosis of diseases or other conditions in humans. To carry out the seeding of bacteria, the peptonated water to dilute and enrich the problem sample and thus obtain results more effectively. However, the results were not as expected and there was no colony growth. But if of other microorganisms by contamination. Keywords: Seeding microorganisms, agar, culture médium.

Ingeniería en Industria Alimentarias 2-501

2. OBJETIVO Preparar agar bacteriológico, verter la cantidad necesaria en cajas de Petri, y sembrar correctamente en estría doble. 3. INTRODUCCIÓN MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.

proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales. TÉCNICA DE SIEMBRA EN ESTRÍA La técnica de siembra en estría es usada para aislar cepas puras en una placa Petri a partir de un inóculo o muestra con diferentes especies. La técnica consiste en, mediante un asa de siembra previamente esterilizada, rayar la superficie de cultivo de una placa Petri de forma que en cada pasada sea menor el número de células depositado, las últimas pasadas deberán depositar un número tan bajo de células que, una vez incubadas, se formen colonias puras. 4. MATERIALES Y REACTIVOS

AGAR Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza. PEPTONAS Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de

Cantidad 1

10 2 2 1

1

1 1 1

Nombre Matraz Erlenmeyer de 500ml Cajas Petri Pesa muestras Espátulas Agitador electromagnétic o Vaso de precipitado de 250 ml Asa de siembra Mechero de alcohol Piceta de agua

Ingeniería en Industria Alimentarias 2-501 destilada Matraz Erlenmeyer 250 ml Tubos ensayo

1

3

Equipo 1 1

1 Reactivos Soluciones buffer (4, 7 y 10)

Reactivos Soluciones buffer (4, 7 y 10)

esterilizo en el autoclave por 15 minutos a 121° C. de de

Potenciómetro Plancha electromagnétic a Campana Agar Bacteriológico

Agar Bacteriológico

5. METODOLOGÍA Esterilización de tubos de ensayo

cajas

Petri y

 Se envolvieron cajas Petri y tubos de ensayo con papel estraza y se metieron a esterilizar por 20 minutos a 121° C. Preparación de agua peptonada esterilizada  Se suspendieron 3.7 g de peptona y se diluyeron en 250ml de agua destilada en un matraz Erlenmeyer de 250 ml, se midió pH (7.0), luego se

Preparación Bacteriológico.

de

Agar

 Se pesó 3.7g de Agar bacteriológico y se adiciono en un matraz Erlenmeyer con 250 ml de agua destilada. Posteriormente el matraz se puso sobre la plancha electromagnética, introduciendo un agitador electromagnético en su interior y se encendió el calor y la agitación. Se dejó el medio de cultivo sobre la plancha hasta que comenzó a ebullir. Se dejó enfriar el agar bacteriológico aproximadamente de 40 a 45°C y se le midió pH óptimo (6.8). Después se esterilizo en la autoclave con una temperatura de 121 ° C por 15 minutos a 15 lb de presión. Vaciado de medio de cultivo y siembra de muestra problema.  Se dejó enfriar el medio de cultivo y se pasó a la campana junto con las cajas Petri. Después se prendió un mechero de alcohol para esterilizar la boca del Matraz y el asa de inoculación. Posteriormente se vacío aproximadamente 25 ml de medio de cultivo en cada caja y se dejaron parcialmente abiertas dentro de la campana para evitar condensación y que

Ingeniería en Industria Alimentarias 2-501 las cajas se contaminaran. Las cajas solidificaron 15 minutos después y se procedió a tomar muestras problemas con un hisopo estéril de una superficie del escritorio, de un teléfono y de la suela de un zapato, diluyéndola en tubos de ensayo con agua peptonada esterilizada. Posteriormente se procedió a sembrar por el método de estría doble, esterilizando el asa de inoculación y tomando inoculo de las tres muestras problema y se incubaron las cajas a una temperatura de 35° C por 24 hrs. 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los resultados obtenidos no fueron los esperados, ya que no se llevó a cabo de manera correcta el estriado, se despegó el asa de siembra en el momento de hacer las estrías, se usó mucha fuerza en el momento de sembrar y las estrías no se hicieron como se debería, no quedaron de manera uniforme, por otro lado la manera de dilución afectó, ya que no se tomó una muestra de manera correcta. Por lo anterior el crecimiento de microorganismos fue muy mínimo y las estrías no quedaron como deberían. 7. CONCLUSIONES Se concluyó que el crecimiento de microorganismos fue mínimo porque no se tomó bien la muestra y por el mal manejo de la asa de siembra.

8. REFERENCIAS o NEOGEN CORPORATION. (2015). AGAR, BACTERIOLÓGICO. Octubre/2019, de NEOGEN Sitio web: https://foodsafety.neogen.c om/sp/agar-bacteriological o Adrián Contreras Garrido. (2/Mayo/2013). Método de siembra en estría. 07/Octubre/2019, de SERAMIX Sitio web: https://seramix.blogs.uv.es/ 2013/05/02/metodo-desiembra-en-estria/...