Reporte 4 Microbiología General laboratorio PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS (CÁLCULOS Y CONTROLES) PDF

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UNIVERSIDAD DE IXTLAHUACA CUI LICENCIATURA EN QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA INCORPORADA A LA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO CLAVE 091-Q

MICROBIOLOGÍA GENERAL

PRE-REPORTE 4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS (CÁLCULOS Y CONTROLES)

DOCENTE Q.F.B ALMEIDA VILLEGAS JORGE ANGEL

DISCENTES PEREZ ROSAS GABRIELA RAMÍREZ GARCÍA IRENE LIZBETH

GRUPO 54

FECHA 09 de septiembre de 2021

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO (CÁLCULOS Y CONTROLES) OBJETIVOS. El discente planeará la preparación de medios de cultivo para los análisis de laboratorio de microbiología y verificara cuales son los controles adecuados para la preparación de los mismos. MARCO TEÓRICO Los medios de cultivo son las soluciones de nutrientes utilizadas para cultivar microorganismos en el laboratorio. Puesto que los cultivos en laboratorio son necesarios para un estudio detallado de un microorganismo, hay que tener un cuidado especial tanto en la preparación como en la selección de los medios si queremos tener éxito en conseguir cultivos adecuados. Para permitir el crecimiento de microorganismos en el laboratorio, es necesario aportarles un medio con nutrientes y condiciones fisicoquímicas adecuadas para su desarrollo. Normalmente se utilizan placas de Petri con agar más nutrientes específicos (según el microorganismo que se desea aislar), aunque también existen medios de cultivo en tubo. No todos los microorganismos son cultivables en el laboratorio, pero sí una enorme cantidad de ellos. Podría hablarse de cultivos bacteriológicos porque en la mayoría de los casos lo que se cultiva en el laboratorio clínico son bacterias, pero también lo pueden hacer otro tipo de microorganismos, como es el caso de los hongos. Es por esto que se habla de cultivo de microorganismos. En microbiología se emplean dos clases de medios de cultivo, los medios definidos y los medios complejos, y se clasifican de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes a) Medios naturales o complejos. Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. A menudo, los medios complejos emplean hidrolizados de productos animales o vegetales, como caseína (la proteína de la leche), carne, soja, extracto de levaduras u otras sustancias muy nutritivas, pero sin embargo no definidas químicamente. Tales

hidrolizados están disponibles comercialmente en forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y disueltos en agua destilada para producir un medio. No obstante, una importante limitación al usar un medio complejo es que no se puede controlar su composición nutritiva exacta. b) Medios definidos o sintéticos. Son

los

medios

que

tienen

una

composición

química

definida

cuali

y

cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigación. Los medios de cultivo definidos se preparan añadiendo a agua destilada cantidades precisas de compuestos orgánicos o inorgánicos purificados. Por consiguiente, en un medio definido se conoce la composición química exacta. La fuente de carbono es de capital importancia en cualquier medio de cultivo, ya que todas las células necesitan grandes cantidades de carbono para hacer nuevo material celular. En un medio definido simple, normalmente está presente una sola fuente de carbono, cuya naturaleza y concentración depende del organismo cultivado. En situaciones particulares, en especial en microbiología clínica, los medios de cultivo pueden ser selectivos o diferenciales. Un medio selectivo contiene compuestos que inhiben selectivamente el crecimiento de algunos microorganismos, pero no el de otros. En cambio, un medio diferencial es aquel al que se añade un indicador, normalmente un colorante, para permitir la diferenciación de reacciones químicas particulares que ocurren durante el crecimiento. Los medios diferenciales son muy útiles para distinguir especies de bacterias, porque unas realizan la reacción particular y otras no. I.

Componentes de un medio de cultivo

De una forma muy general, se puede decir que los medios de cultivo se componen de: ●

Una fuente de carbono. Normalmente son azúcares sencillos como, por ejemplo, glucosa, lactosa, etc., pero existen también algunos organismos que usan CO2 (en este caso serían autótrofos, al igual que las plantas).

●

Una fuente de nitrógeno. Se suelen usar proteínas parcialmente hidrolizadas, peptonas.

●

Otros componentes, como Na+, K+, vitaminas, etc.

●

Amortiguadores de pH (soluciones tampón o buffer). Son sustancias que ayudan a mantener el pH del medio de cultivo dentro de un rango adecuado

para el crecimiento de los microorganismos. Por ejemplo, suelen usarse como tampones los fosfatos disódicos (Na2HPO4) o monosódicos (NaH2PO4). Es importante tener en cuenta que hay ciertos tipos de microorganismos con requerimientos especiales para su desarrollo, que se añadirán al medio en caso necesario II.

Según la proporción de agar, existen tres tipos: ●

Líquidos (caldos): No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos crecen por todo el medio. El crecimiento en este tipo de medios es más rápido puesto que la movilidad permite acceder de una forma más fácil a los nutrientes.

●

Sólidos: Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1,5%. El crecimiento se desarrolla en la superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri o en tubos de ensayo.

●

Semisólidos: Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0,5%. Se utilizan para pruebas bioquímicas y de movilidad.

III.

Almacenamiento de los medios de cultivo

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o estar contaminados. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft). Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe

pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH, etc.) y microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso. MATERIAL Y REACTIVOS. 2. Individual 3. 1.-Calculadora 4. Equipo Grupo 5. N/A N/A METODOLOGÍA. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: ●

Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad.

●

Realizar los cálculos correspondientes para cada medio a preparar.

●

Etiquetar adecuadamente los matraces y cajas a utilizar.

●

Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.

●

Utilizar materiales de vidrios bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.

●

Medir el pH de los medios antes y después de esterilizar, con un potenciómetro adecuado.

●

Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

●

Al realizar el vertido de los medios en las cajas Petri, controlar la temperatura (40-45°C).

●

Evitar que se forme agua de condensación.

●

Tomar las medidas necesarias para no contaminar los medios, tanto en los matraces como en las cajas

RESULTADOS El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos, y para esto es necesario brindarles las condiciones adecuadas, además, los microorganismos requieren energía metabólica para sintetizar macromoléculas y mantener gradientes químicos esenciales a través de sus membranas. Los factores que deben controlarse durante la proliferación incluyen nutrientes, pH, temperatura, aireación, concentración de sales y fuerza iónica del medio Características de medios de cultivos. Una de las características de los medios es que la mayor parte del peso seco de los microorganismos es materia orgánica que contiene elementos como carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, fósforo y azufre. Además, se necesitan iones inorgánicos como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio y cloruro para facilitar los procesos enzimáticos y mantener los gradientes químicos a través de la membrana celular. I.

Dentro de los factores de calidad que se deben considerar están:

a) Todos los medios se deben etiquetar, si como mantener un registro con el nombre del producto, nombre de la casa proveedora, fecha de expiración, fecha de recibo, etc. b) Las pruebas básicas de control de calidad de los medios preparados deben incluir: medición del pH, pruebas de esterilidad, capacidad de crecimiento y reacción, aspecto, dureza y profundidad del agar Por

ejemplo

la

microorganismos:

siguiente

tabla

muestra

unos

ejemplos,

con

diferentes

II.

Cálculos de un medio de cultivo microbiológico:

Existen diferentes formas de realizar los cálculos de un medio de cultivo, puede ser por medio de porcentajes, o lo más común es realizar una regla de tres, teniendo en cuenta la cantidad en mililitros que se requieren para realizar la muestra, posteriormente hacer la relación de acuerdo a las cantidades establecidas para cada tipo de cultivo. ANÁLISIS DE RESULTADOS En esta práctica se presentaron distintos videos con el objetivo de comprender los medios de cultivo , asimismo las precauciones que se deben tomar al prepararlos, uno de ellos, el agar que es un elemento solidificante en los medios de cultivo, este debe estar exento de cualquier agente contaminante, para facilitar el crecimiento, identificación, y desarrollo de l muestra que se quiere estudiar, de aquí radica la importancia de seguir una metodología correcta al momento de preparar cultivos, del mismo modo conocer los factores de calidad antes mencionados, agregando que la esterilización en autoclave es fundamental para los medios de cultivo con agar pues de esta manera se evita el riesgo de la contaminación de la muestra. En los videos también se mencionaron los diferentes tipos de agar, como Agar SS o Agar Salmonella – Shigella es un medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella a partir de muestras fecales o torundas rectales de pacientes en los que hay sospecha de una infección entérica bacteriana, Agar EMB es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram, Agar chocolate, Agar sangre; generalmente ovina que proporciona el crecimiento de la gran mayoría de las bacterias Grampositivas y Gram-negativas así como de hongos (mohos y levaduras), entre otros. CONCLUSIONES La planeación, preparación y conocimiento de los medios de cultivo en el laboratorio de microbiología nos permiten llevar a cabo los análisis correspondientes y adecuados para verificar los controles que se deben seguir para la preparación de los mismos, ya que su calidad constituye una garantía para la obtención de resultados confiables. También es de suma importancia conocer los diferentes medios de cultivo, así como los pasos necesarios para elaborar un medio de cultivo y las diferentes técnicas para realizar los cálculos correspondientes a las cantidades necesarias para su preparación.

REFERENCIAS ● Barrero L.. Microbiología clínica Universidad Europea de Madrid., EDITORIAL SÍNTESIS, S. A. Vallehermoso, 34. 28015 Madrid pp 11- 90 ● Michel T. Madigan, John M, Martinko, Paul V Clark. Brock Biología De Los Microorganismos Duodécima Edición Pearson Education, Capítulo 5 Nutrición, cultivo y metabolismo microbiano ● Herrera. M, Campos M, Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Carlos Sáenz Herrera Control de la Calidad para un Laboratorio de Microbiología. Rev. Méd. Hosp. Nac. Niños (Costa Rica) vol.40 n.1 San José Jan. 2005 ● Burguet Lago, Nancy, Castillo Abraham, Lourdes, Control de calidad de los medios de cultivo utilizados en el monitoreo ambiental de las áreas clasificadas de producción. Revista Cubana de Higiene y Epidemiología. 2013; 51 (2): 155160. ● RAFÍA Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela....