Skrócone notatki z wykładów PDF

Preview

Summary

Skrót notatek wykładowych z biologii molekularnej...

Description

Etapy reakcji PCR: 1.denaturacja matrycowego DNA, rozplecenie łańcuchów na 2 nici pod wpływem T 2.przyłączenie starterów do nici matrycowej 3. Wydłużenie (elongacja) starterów-budowa nowych nici DNA PCR+RFLP etapy: 1.reakcja PCR –powielanie badanego frag.DNA 2. Trawienie produktu PCR enzymem restrykcyjnym 3.elektroforeza produktu reakcji trawienia 4. Ocena wzoru prążkowego Sekwencjonowanie – metoda Sangiera – do reakcji dodaje się niewielką ilość dideoksynukleotydów, które SA wbudowywane w DNA, ale nie mogą być substratem do dalszego wydłużania nici. W ten sposób otrzymuje się fragmenty DNA zakończone specyficznym nukleotydem. Etapy: -reakcja PCR -elektroforeza produktów reakcji PCR - oczyszczenie produktu reakcji PCR, który staje się matryca w PCR sekwencjon. - PCR sekwencjonowalny - rozdział na sekwenatorze Optymalizacja PCR: -każda para starterów musi być optycznie izolowana -zwykle optymalizacji wymagaja; stężenia( Mg2+, starterow, matrycy), temp.anneolingu, czas wydłużenia gniazdowy PCR: -dwie rozne pary starterow- „zewnetrzne” i „wewnętrzne” -duza reakcja PCR:przenoszona ze starterami, „zewnętrznymi”, druga ze starterami „wew” -produkt pierwszej reakcji stanowi matryce w reakcji drugiej -sekwencja powielana przy uzyciu starterow „wewnętrznych” lezy w obrebie sekwencji powielanej przy uzyciu starterow „zewn” Multiplex PCR: -1 sekwencja PCR - wiecej niż 1 para starterow -jednoczesne powielanie wiecej niż jednej sekwencji - szybkie analizowanie duzych obszarow DNA reakcje z tzw. Wzorcem wewnętrznym Skład mieszaniny reakcyjnej: -matrycowy DNA, -trifosforany deoksyrybonukleozydów, -startery (primery) -termostabilna polimeraza DNA RT-PCR modyfikacja polegająca na użyciu mRNA jako matrycy. Synteza DNA na matrycy mRNA odbywa się przy użyciu odwrotnej transkryptazy (RT). Następnie DNA namnaża się za pomocą zwykłej reakcji PCR. Metoda ta pozwala na amplifikację wyłącznie sekwencji zawartej w dojrzałym mRNA, a więc tylko egzonów. Powstały DNA określany jest jako cDNA...