Informe sobre la Siembra de bacterias en medios de cultivos 2017 2018 PDF

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informe sobre la Siembra de bacterias en medios de cultivos 2017 2018.
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DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

Asignatura:

Microbiología

Práctica:

N° 7

Fecha:

18/Enero/2018

Grupo:

Nº2

Tema:

Siembra de bacterias en medios de cultivos

Período Octubre – Febrero 2018

I.

INTRODUCCION

Las bacterias fueron descritas por primera vez por el naturalista holandés Antoni van Leeuwenhoek, que las observó con la ayuda de un microscopio simple construido por él mismo. Comunicó su descubrimiento a la Real Sociedad de Londres en 1683, pero la bacteriología no se desarrolló como ciencia hasta mediados del siglo XIX[ CITATION Lóp06 \l 12298 ]. Los microorganismos crecen fácilmente cuando se les facilitan todas las condiciones necesarias para su multiplicación. De esta manera una sola bacteria puede dar lugar a la generación de miles de millones de individuos en pocas horas. Estas células, creciendo y acumulándose por superposición sobre una superficie sólida, dan lugar a una masa de bacterias que conocemos con el nombre de colonia, cuyo tamaño pude oscilar entre 0,1 mm y 1 cm (o más), dependiendo de la rapidez de reproducción y del tiempo transcurrido[ CITATION Man05 \l 12298 ]. Si al colocar alguna muestra con bacterias en un medio de cultivo, las bacterias quedan depositadas sobre la superficie del medio de cultivo con una separación pequeña, lo más probable es que las colonias se mezclen y no podamos distinguir claramente sus características morfológicas, pero si la separación entre una bacteria y otra es mayor que el tamaño de la colonia, entonces sí es posible la obtención de colonias aisladas, para utilizarlas posteriormente en los procedimientos de identificación y determinación de susceptibilidad antimicrobiana[ CITATION Man05 \l 12298 ]. II.

OBJETIVOS: II.1

Objetivo general

Sembrar bacterias de distintas muestras mediante la utilización de métodos de siembra prácticos en medios de cultivos específicos para observar su desarrollo y comportamiento. II.2

Objetivos específicos

 Aislar bacterias de distintos lugares para apreciar su desarrollo en un medio de cultivo.  Aprender el modo correcto de emplear técnicas de siembra para bacterias en distintos medios de cultivo. III.

REVISION DE LITERATURA

Bacterias

Son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los protistas inferiores. Son células de tamaño variable cuyo límite inferior está en las 0,2m y el superior en las 50m; sus dimensiones medias oscilan entre 0,5 y 1m. Las bacterias tienen una estructura menos compleja que la de las células de los organismos superiores: son células procariotas (su núcleo está formado por un único cromosoma y carecen de membrana nuclear). Igualmente son muy diferentes a los virus, que no pueden desarrollarse más dentro de las células y que sólo contienen un ácido nucleico .Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque gérmenes son patógenos. Análogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar importantes progresos en la investigación, concretamente en fisiología celular y en genética[ CITATION Dia14 \l 3082 ]. Las bacterias forman uno de los tres dominios en los que se dividen los seres vivos. En los antiguos sistemas taxonómicos, las bacterias formaban un subreino del reino Monera. El término bacteria también se emplea para denominar a todos los organismos unicelulares sin núcleo diferenciado que constituyen el nivel de organización procarionte. Los organismos procariontes se subdividen en Eubacterias (dominio Bacteria) y Arqueó bacterias (dominio Archaea). Son los organismos más abundantes del planeta y su tamaño ronda entre las 0.5 y 5 μm (micrones). Pueden ser de carácter patógeno o no. Generalmente poseen una pared celular, similar a la de plantas u hongos, pero compuesta por peptidoglicanos; muchos antibióticos son efectivos sólo contra las bacterias ya que inhiben la formación de esta pared celular. Muchas de ellas también poseen cilios o flagelos[ CITATION Gom11 \l 3082 ]. Medios de cultivos para Bacterias Según [ CITATION Dia14 \l 3082 ], estos son los medios más óptimos para el desarrollo de las bacterias Agar Campy con sangre Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio está suplementado con sangre y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la mayoría de las bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Agar BHI con 5% sangre de oveja El agar infusión cerebro-corazón con 5-10% de sangre de oveja adicionado de cloranfenicol y gentamicina inhibe el crecimiento de bacterias, pero permite el

crecimiento de hongos, incluso de los más exigentes. Este agar se emplea como medio de aislamiento primario para el crecimiento de hongos, ya que permite una mejor recuperación de patógenos que el agar glucosa de Sabouraud. Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos) Es un medio diferencial recomendado para el análisis bacteriológico de orina ya que en él crecen profusamente la gran mayoría de las bacterias, tanto Gram negativas como Gram positivas, que provocan infecciones urinarias, pudiéndose diferenciar o identificar sus respectivas colonias. Debido a su deficiencia en electrolitos (no lleva cloruro sódico), no permite que las colonias de Proteus invadan la placa de cultivo, lo que facilita el recuento. La lactosa es el único carbohidrato presente. La cistina facilita el crecimiento de los coliformes dependientes de ella. El azul de bromotimol permite distinguir las colonias de bacterias fermentadoras de las que no lo son. Los microorganismos fermentadores de lactosa dan lugar a colonias de color amarillo. Los no fermentadores dan lugar a colonias traslúcidas o de color claro. La alcalinización del medio provoca la aparición de un color azul intenso. Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para larecuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comité de la Organización Mundial de la Salud sobre estandarización de pruebas de susceptibilidad. Este Comité lo propuso ya en 1970 para determinar la susceptibilidad de los microorganismos frente a los antimicrobianos, por no llevar incorporados inhibidores de los antimicrobianos, como, por ejemplo, el PABA (ácido p-amino benzoico), que anula la actividad de sulfamidas y antibióticos y debido a

su reproducibilidad y aceptación por las personas que trabajan en este campo. Desde entonces su empleo se ha generalizado. Constituyentes de medios de cultivos EXTRACTOS Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta[ CITATION Ter14 \l 3082 ]. PEPTONAS Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales[ CITATION Gom11 \l 3082 ]. IV.

MATERIALES Y EQUIPOS Equipos  Estufa de incubación  Cámara de flujo laminar Materiales  Pipetas volumétricas  Probetas  Vaso de precipitación  Erlenmeyer  Matraces  Kit de disección  Mechero de alcohol  Tubos de ensayo  Hisopos Reactivos e insumos  Agua destilada estéril  Alcohol antiséptico  Medios de cultivo de Agar Sangre 3822

 Medios de cultivo de Agar MacConkey  Muestras con bacterias V.

PROCEDIMIENTO

Método de siembra directa de bacterias contenidas en el agua del grifo (a cargo de Galo Cabrera) 1. Tome la muestra en una botella limpia del agua del baño de hombres 2. Luego para la siembra Tome una caja Petri que contenía Mueller-Hinton 3. Después entre a la cámara de flujo laminar para realizar la siembra 4. Ya dentro de la cámara de flujo laminar para hacer la siembra puse 1 mL de la muestra tomada en la caja Petri 5. Luego flamee una aguja y se esparci la muestra por toda caja Petri en forma de

estrías. 6. Sellé la caja Petri con el papel parafilm y procedí a rotular como es debido. 7. Guardé la caja en la estufa a temperatura de 32ºC. Aislamiento de bacterias de la laringe (A cargo de Leonardo Pincay) 1. Tomé un hisopo y procedí a sacar una muestra de la laringe sobando suavemente el hisopo alrededor de la laringe. 2. Luego coloque el hisopo en un tubo de ensayo que contenía 10 ml de agua destilada estéril en donde lo deje remojar por 3 minutos moviendo suavemente el tubo de ensayo. 3. Luego procedí a tomar 1 ml de la solución y la coloque en la caja Petri que contenía el medio de cultivo de Agar Sangre 3822. 4. Luego con la ayuda de un rastrillo lo distribuí en forma de estrías para tratar de aislar estreptococos de la laringe. 5. Luego sellé la caja Petri y la coloque en la estufa de 32º. Siembra de bacterias obtenidas del hígado de pollo (A cargo de Gregorio Zambrano) 1. Llené dos tubos de ensayo con 10 mL de agua destilada estéril y los tapamos para evitar que se contaminen. 2. Procedí a cortar una muestra del hígado de alrededor 1cm3. 3. Desinfecté el mortero con el pistilo para depositar allí la muestra antes obtenida.

4. Con el pistilo machaqué la muestra por alrededor de un minuto hasta que obtuvé una pasta uniforme y sin gránulos. 5. Al mortero que contenía la pasta del hígado machacado le agregué 10 mL de agua destilada estéril y luego mezclé. 6. Dentro de la cámara de flujo laminar, extraje 1 mL de la solución que se encontraba en el mortero para colocarla en un tubo de ensayo que contenía las 10 mL de agua destilada estéril y luego mezclé. 7. De igual manera extraje 1 mL de solución que se encontraba en el tubo de ensayo ya antes utilizado para depositarla en el otro tubo de ensayo que contenía las 10 mL de agua destilada estéril y luego procedí a mezclar. 8. De esta solución nuevamente extraje 1 mL de solución y la coloque sobre la caja Petri que tenía el medio de cultivo Agar Sangre. 9. Con ayuda del rastrillo distribuí la muestra antes depositada en tres cuadrantes. 10. Sellé la caja Petri con el papel parafilm y procedí a rotular como es debido. 11. Guardé la caja en la estufa a temperatura de 32ºC. VI.

RESULTADOS 

Se realizó la preparación de una solución para incubar las bacterias. Se esperan obtener diferentes tipos de bacterias en el caso de las que posiblemente se encuentran en el hígado de pollo son E. Coli y Salmonella.



En las cajas en las cuales se sembró bacterias provenientes del grifo, posiblemente se encuentren bacterias como Vibrio cholera que causa el cólera, pero también conviven las bacterias E. coli, Salmonella typhi y Shigella que inflaman el estómago

 En las cajas en las cuales se sembró bacterias provenientes de la faringe, posiblemente se encuentren bacterias como Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Moraxella catarrhalis. VII.

CONCLUSIONES 

Tanto las bacterias como los hongos necesitan medios de cultivo específicos para su desarrollo; tal es caso del Agar Sangre y Agar MacConkey que cuentan con sustancias nutritivas para que las bacterias se desarrollen en condiciones favorables.



La desinfección de los materiales a utilizar es fundamental para evitar que otras bacterias se sumen al medio de cultivo.

VIII.

RECOMENDACIONES 

Transportar las muestras de manera correcta para evitar que se contaminen.



Utilizar un medio de cultivo apropiado para la bacteria que se desea cultivar y analizar.

IX.

BIBLIOGRAFIA

Aguirre, D. (2014). Biotecnologia Microbiana. Obtenido de http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2009/Micr oBiol/Resumen.pdf Gretel, G. (2011). Instituto de ciencas agricolas . Obtenido de http://www.redalyc.org/pdf/1932/193215825002.pdf Higa, T. (2014). Microorganismo Benficos. Obtenido de http://fundases.com/userfiles/file/MicroorG_Benef_Efect.pdf López, L. (12 de 12 de 2006). Introduccion a Bacterias. Recuperado el 21 de 12 de 2016, de Universidad Nacional del Nordeste: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf Manacorda, A. M., & Cuadros, D. (2005). Microbiologia General. España: Iáñez. Recuperado el 21 de 01 de 2017

X.

ANEXOS

Ilustración 1. Corte de la muestra de hígado.

Ilustración 2. Preparación de la solución madre.

Ilustración 3. Caja petri sellada y rotulada. Ilustración 4. Bacterias sembradas en la Incubadora

XI.

CUESTIONARIO



¿Cuál es la temperatura óptima para el crecimiento y desarrollo de bacterias? Alrededor de 32ºC-33ºC



Según la forma, ¿Cómo se clasifica a las bacterias? Bacilo, coco, espirilo y espiroquete....