MÉtodo DNS - Anotações - roteiro aula prática Biocel- Chiaratti PDF

Preview

Summary

Anotações - roteiro aula prática Biocel- Chiaratti...

Description

MÉTODO DNS O QUE É E PARA QUE SERVE “o método do DNS”. É um método rápido e prático na determinação de açúcares redutores, e tem grande aplicabilidade industrial. 

Na indústria açucareira, serve para controlar se o açúcar, a sacarose, quando hidrolisado sofreu processo de redução, que não é tão facilmente percebido no acompanhamento do processo. Também é utilizado no acompanhamento do processo de fermentação, que permite verificar as taxas de consumo de açúcar pelo microorganismo, necessário para a compreensão da cinética do processo. CARACTERÍSTICAS IMPORTANTES

Um açúcar redutor é um açúcar no qual o carbono carbonila (anomérico) não está envolvido em uma ligação glicosídica e, portanto, pode sofrer oxidação. O método do DNS é um método onde ocorre a oxidação do grupo carbonila. O oxidante, chamado DNS utiliza o ácido dinitro-salicílico; sal de Rochelle, (solução de tártaro de sódio de potássio) que serve para prevenir o reagente da ação do oxigênio dissolvido; fenol, que é utilizado para aumentar a quantidade de cor produzida; bissulfito, que é um estabilizante da cor obtida na presença do fenol; hidróxido de sódio, que é o redutor da ação da glicose sobre o ácido dinitro-salicílico. O método DNS utiliza a característica redutora de açúcares para sua quantificação. O princípio vem através de uma molécula chamada Ácido 3,5 – dinitro salicílico (DNS) que quando puro apresenta uma coloração alaranjada, este ácido é facilmente reduzido por açúcares, embora possa apresentar menor eficiência se a solução utilizada possuir outras espécies redutoras fortes. Quando reduzido, o DNS se torna ácido 3-amino – 5 – nitro salicílico, e passa a apresentar-se com uma coloração acastanhada. 

Através dessa mudança de coloração é possível construir roteiros de ensaios colorimétricos e medir a quantidade de açúcares relacionando a quantidade de DNS reduzido (a estequiometria da reação é 1:1). Todavia, um dos principais substratos para a fermentação de microorganismos é a sacarose, que não possui poder redutor, é necessário neste caso, a hidrólise ácida desses açúcares em glicose e frutose, para apenas depois disto proceder como uma análise pelo método DNS comum. INIBIÇÃO DA INVERTASE

Atividade enzimática das enzimas invertases foi determinada através da quantificação de açúcares redutores produzidos, utilizando o ácido 3,5’dinitrosalicílico (DNS), segundo o método de Miller (1959). DNS,o qual inativa a enzima invertase possibilitando determinar

o teor de açúcares redutores naquele momento.Em um processo onde o ácido se liga ao sítio alostérico da invertase, causando uma mudança conformacional e diminuindo a afinidade da enzima pelo substrato. http://www.ebah.com.br/content/ABAAABHoAAD/2-relatorio-bioquimica-determinacao-acucaresredutores-dns http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfhbMAF/relatorio-3-dosagem-pelo-metodo-dns...