Reporte Pruebas para identificar mohos y levaduras PDF

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Microbiología farmacéutica...

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Garcia Montañez Angel Girard. Equipo: 1. Práctica No. 8. Pruebas para identificar mohos y levaduras. Objetivos: G eneral: Identificar mohos filamentosos y levaduras de una muestra. E specíficos: a) Identificar un moho por medio de la técnica Ridell (microcultivo). b) Identificar una levadura mediante pruebas de fermentación y/o asimilación de azúcares.

Resultados:

Introducción: Los mohos organismos pertenecientes del Reino Fungí, se caracterizan por tener un cuerpo formado por estructura filamentosa con ramificaciones, que se conocen como hifas, el conjunto de hifas constituye micelio, carecen de clorofila, se alimentan por absorción pudiendo propagarse por esporas flagelados o no, las paredes se alimentan por absorción pudiendo propagarse por esporas flagelados o no, la quitina es el constituyente de la pared celular, se disponen de microfibrillas como la celulosa; otros polisacáridos, como los mananos, galactanos y quitosán reemplazan a la quitina en algunos grupos de hongos. Las paredes celulares fúngicas constan de 80-90% de carbohidratos, siendo las proteínas, los lípidos, polifosfatos y iones inorgánicos el material cementante. En muchos hongos, las hifas se prolongan a través de un proceso conocido como extensión apical; pueden ser cenocíticas y tabicadas o septadas. Las hifas que crecen sumergidas o en la superficie de un medio de cultivo se llaman hifas vegetativas; las que se proyectan por encima de la superficie del medio se conocen como hifas aéreas las cuales dan lugar a estructuras especializadas o conidios (elementos reproductores asexuales). La morfología de los hongos no es fija, ya que algunos hongos dimórficos, pueden adoptar una morfología de levadura dependiendo de las condiciones ambientales. En algunos hongos el micelio está constituido por células que contienen uno o dos núcleos; otros tienen micelio cenocítico, con muchos núcleos y está integrado por una célula multinucleada continua y tubular que puede o no ramificarse también el Micelio puede presentar septos y es tabicado.

¿Qué son los mohos, levaduras y cuáles son sus características? ¿Qué importancia tienen estos microorganismos? ¿Cómo se clasifican los hongos? ¿Cómo identificamos a los mohos? ¿Cómo identificamos a las levaduras?

Crecen formando colonias en un medio selectivo a 28°C. Son microorganismos quimioheterótrofos. Las levaduras son hongos cuya forma dominante de crecimiento es unicelular no filamentosa con una morfología esférica u oval típica y miden de 3-10 mm. Poseen un núcleo y se multiplican por reproducción sexual o asexual, por gemación o por fisión transversal. La reproducción sexual cuando ocurre, es por medio de ascosporas contenidas en un saso o asca. Crecen a partir de una temperatura de 30-35°C.Muchas levaduras, en determinadas circunstancias y dependiendo de la especie pueden producir hifas y seudohifas (no tienen septos verdaderos, sino estrechamientos o constricciones; son prolongaciones de las blastoconidias) Su distinción con los hongos filamentosos es muy subjetiva porque existen formas intermedias entre levaduras y hongos superiores típicos La importancia que tienen estos microorganismos, radica en que son descomponedores de la materia orgánica, pues reciclan los nutrientes y los reincorporan al suelo. Por otro lado, forman relaciones importantes con las algas (líquenes) y con las raíces de muchas plantas (micorrizas) Algunos intervienen en la elaboración de pan, vino y quesos. Otros producen antibióticos; así, la penicilina, el primer antibiótico sintetizado, se obtiene se un hongo llamado Penicillium sp. Algunos causan graves enfermedades al hombre y suelen afectar también plantas, animales, granos y semillas. Los hongos se clasifican en dos grupos: ➢ Mohos filamentosos. Estos a su vez, se clasifican en 4 grandes grupos: • Zygomycota: Micelio filamentoso continuo o cenocítico. Reproducción sexual. • Ascomycota: Reproducción sexual por medio de ascosporas. Reproducción asexual diversa por gemación y por varias esporas. • Basidiomycota: Reproducción sexual por medio de basidiósporas. • Deuteromycota: Reproducción asexual. Produce varios tipos de esporas vegetativas. ➢ Levaduras.

Procedimiento:

De acuerdo con los resultados obtenidos de los 3 mohos y las 2 levaduras, con el método de microcultivo y pruebas de asimilación y/o fermentación de azúcares, se identificó lo siguiente: para el moho 1, se determinó que es un moho del género puesto que, con la información consultada y comparando lo que se observó en el microscopio, notamos que presenta hifas septadas hialinas, que tiene conidióforos terverticilados de pared lisa, esta ramificado con métulas y fiálides ampuliformes donde nacen los conidios lisos; por parte de la morfología colonial, este moho presenta una textura algodonosa, superficie plegada y un color verdoso rodeado de blanco, presenta exudado. Además, por el reverso que muestra el agar PDA para este moho es de color amarillo y se debe por su pigmentación. Para la determinación de su especie (la cual fue chrysogenum), se Debe tomar en cuenta las medidas que presenta la morfología microscópica para confirmar que si es P. chrysogenum. Para el moho 2, se determinó que es Aspergillus niger, ya que posee un conidióforo liso, suelen ser hialinos o pardos, presenta vesículas globosas de color pardo oscuro, además presenta conidios que constituyen cadenas, los cuales se originan en la célula conidiógena o fiálide. En algunos hay células adyacentes a las fiálides denominadas métulas o células de soporte; en su morfología colonial, este moho presenta una textura pulverulenta, superficie plegada y un color verde pardo, con reverso color crema. En el caso del moho 3, se determinó que es Rhizopus sp., ya que presenta un micelio macrosifonado, hialino cenocítico, en los puntos donde se conectan los esporangióforos y los estolones que presentan, se forman los rizoides. Los esporangióforos son largos y no se ramifican, culminan en esporangios de gran tamaño, con esporangiosporas hialina; en su morfología colonial este moho presenta una textura algodonosa, superficie plana y un color blanco y gris oscuro. En el caso de las levaduras, se realizaron pruebas de asimilación y se observó morfología colonial, ya que en el caso de morfología microscópica es muy difícil diferenciar las levaduras; por lo que, para la levadura 1 se determinó que es Cándida albicans, puesto que, en las pruebas realizadas, los resultados fueron los siguientes: Sacarosa- negativo, Maltosa-positivo Lactosa-negativo, Trehalosa-Positivo y Glucosa-Positivo; los resultados positivos indican que son capaces de fermentar los azúcares (Maltosa, Trehalosa y Glucosa) produciendo gas en el medio; por parte de la morfología microscópica se observan células redondas u ovaladas presenta seudohifas verdaderas y clamidosporas; en su morfología colonial, se observan colonias blancas, blandas, cremosas y lisas. Para la levadura 2 se determinó que es Saccharomyces cerevisiae, ya que, con las pruebas realizadas, obtuvimos lo siguiente: Sacarosa-positivo, Maltosa-asimilación, Lactosa-negativo, Galactosa-asimilación y Glucosa-positivo; como se mencionó anteriormente, todos los positivos indican fermentación con producción de gas y los resultados de asimilación indican crecimiento mayor que el del control negativo; por parte de la morfología microscópica se observan blastoconidios, monogemantes, de base estrecha, presentan pseudomicelio con pseudohifas cortas; en su morfología colonial, se observan colonias húmedas, cremosas, convexas, lisas y opacas, con colores que van desde el blanco a color crema. Otras pruebas que se pueden realizar para la identificación de levaduras son las pruebas bioquímicas de ureasa y nitratos. Es de gran importancia identificar estos microorganismos, ya que, podemos usarlos para la producción de metabolitos como la producción de penicilina por parte de Penicillium chrysogenum o, por ejemplo, la mayor parte de la producción mundial de ácido cítrico la realiza Aspergillius niger; o también son de interés clínico, como Cándida albicans para la identificación de la infección candidiasis, la cual es provocada por este microorganismo.

Conclusiones: ➢ ➢ ➢ ➢

El método de microcultivo permite la observación de las estructuras microscópicas de los hongos filamentosos. Rhizopus y Aspergillus suelen confundirse, Rhizopus tiene rizoides con los que se distinguen de Aspergillus. Las levaduras se reproducen por gemación por lo que, no solo se identifican con morfología, sino que se realizan pruebas bioquímicas para identificar su metabolismo. La importancia de identificar estos microorganismos radica en saber qué moho y levadura puede ser útil para la producción de algún metabolito ya sea primario o secundario.

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