Determinación de hemoglobina en sangre e inducción de drepanocitos. PDF

Preview

Summary

BIOLOGIA MOLECULARPRACTICA NO. 4Determinación de hemoglobina en sangre einducción de drepanocitos.FUNDAMENTOEl análisis de hemoglobina mide los niveles de hemoglobina en la sangre. La hemoglobina es una proteína de los glóbulos rojos que lleva oxígeno de los pulmones al resto del cuerpo. Los niveles...

Description

BIOLOGIA MOLECULAR PRACTICA NO.

4

Determinación de hemoglobina en sangre e inducción de drepanocitos.

FUNDAMENTO El análisis de hemoglobina mide los niveles de hemoglobina en la sangre. La hemoglobina es una proteína de los glóbulos rojos que lleva oxígeno de los pulmones al resto del cuerpo. Los niveles anormales de hemoglobina podrían ser signo de un trastorno de la sangre.

Otros nombres: Hb, Hgb. El análisis de hemoglobina se usa comúnmente para detectar anemia, un nivel anormalmente bajo de glóbulos rojos en el cuerpo. Cuando una persona tiene anemia, las células no reciben el oxígeno que necesitan. Los análisis de hemoglobina también se hacen comúnmente con otras pruebas, por ejemplo:  Hematocrito, que mide el porcentaje de glóbulos rojos en la sangre  Conteo sanguíneo completo, que mide el número y tipo de glóbulos de la sangre Su médico o profesional de la salud podría pedir este análisis como parte de un examen de rutina o si usted:

- Tiene síntomas de anemia como debilidad, mareos, palidez o manos y pies fríos - Tiene antecedentes familiares de talasemia, anemia falciforme u otros trastornos hereditarios de la sangre - Come una dieta baja en hierro y minerales - Tiene una infección a largo plazo - Ha perdido una cantidad excesiva de sangre por una herida o un procedimiento quirúrgico Si los niveles de hemoglobina están bajos, esto podría ser signo de:

Diferentes tipos de anemia: o o o o

Talasemia Deficiencia de hierro Enfermedad del hígado Cáncer y otras enfermedades

Si los niveles de hemoglobina están altos, esto podría ser signo de: o Enfermedad pulmonar o Enfermedad del corazón o Policitemia vera, un trastorno en que el cuerpo produce demasiados glóbulos rojos. Puede causar dolores de cabeza, cansancio y dificultad para respirar

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno. Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipeptídicas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipéptidos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxígeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb). La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el número o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto, existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:

 Hemoglobina A: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del total.

 Hemoglobina A´: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano está en porción menor de 3%.  Hemoglobina F (fetal): consta de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene mayor afinidad por el oxígeno.  Hemoglobina Gower: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.

La hemoglobina (Hb) S

Es la consecuencia de una mutación puntual en la posición 6 de la cadena ß de la globina que resulta en la

sustitución del ácido glutámico por la valina. La HbS polimeriza en condiciones de baja tensión de oxígeno y deforma al hematíe. El hematíe con Hb polimerizada tiene una sobrevida acortada y ocluye la microcirculación, lo que da lugar a la anemia hemolítica crónica y a las crisis vasoclusivas dolorosas que marcan en gran medida el cuadro clínico de la enfermedad. La oclusión vascular es un proceso complejo debido fundamentalmente a la prolongación del tiempo de tránsito de los hematíes a través de la microcirculación y/o a la disminución del tiempo de demora de polimerización de la HbS. En la actualidad se considera a la oclusión en la microcirculación como una forma de injuria de reperfusión en la que el estrés oxidativo y la inflamación llevan al daño crónico de los órganos. Los leucocitos y factores de la coagulación participan en el proceso. La anemia hemolítica contribuye a la oclusión vascular porque el aumento de reticulocitos, con más moléculas de adhesión en su superficie que las células maduras, determina su mayor adhesión al endotelio y porque la Hb libre en plasma consume óxido nítrico. El óxido nítrico actúa en diferentes formas, una de las más importantes es que desvía el balance normal entre vasodilataciónvasoconstricción hacia la vasoconstricción. Como consecuencia de estos hechos se describe un subfenotipo caracterizado por hipertensión pulmonar, accidente vascular encefálico, priapismo y úlcera maleolar. Existen factores genéticos que influyen en la severidad del cuadro clínico como la mutación 158 C-T en el gen de la globina g y la a talasemia. La primera aumenta la HbF y la segunda disminuye la CHCM, el número de células densas y la intensidad de la hemólisis. Sin embargo, la relación entre a talasemia y la severidad de la enfermedad no es clara.

OBJETIVO Determinar si existe una patología en las muestras de sangre mediante la hemoglobina y mediante los drepanocitos en la sangre circulante y así tener una diagnóstico clínico a lo que se presenta en este tipo de muestras mediante microscopio e identificar una anormalidad.

MATERIAL

Material y Equipo:     

Espectrofotómetro. Pipeta semiautomática Tubos de ensayo. Gradilla Gasa

Reactivos:  EDTA  Reactivo Drabkin  Metabilsulfito de sodio Reactivos biológicos:  Sangre venosa con EDTA.

PROCEDIMIENTO HEMOGLOBINA La determinación de la hemoglobina se efectuará mediante el método de la cianometahemoglobina cuyo fundamento es el siguiente: la Hb presente en la muestra, en presencia de ferricianuro, se oxida a hemiglobina (Hi, también llamada metahemoglobina) que a su vez se combina con iones de cianuro a pH 7.2, convirtiéndose en cianuro de hemiglobina (HiCN o cianmetahemoglobina). Todos los hemocromógenos, a excepción de la sulfohemoglobina, reaccionan completamente en 3 minutos a una lectura de 540 nm. 1. Se extrae una muestra de sangre preservada con EDTA. 2. Preparar las siguientes disoluciones. 3. En el TUBO 2 se agitará la solución por inversión (3 veces aproximadamente), de manera que induzca la hemolisis de la muestra.

4. Reposar por un lapso de 5 minutos (TUBO 2). 5. Una vez transcurrido el tiempo de reposo, se mide la absorbancia del contenido del TUBO 2 en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 540 nm, ajustando previamente con el blanco reactivo (TUBO1) 6. Efectuar cálculo para determinar la concentración de la Hemoglobina INDUCCIÓN DE DREPANOCITOS 1. En un tubo de ensayo depositar una gota de sangre problema y 3 gotas de metabisulfito de sodio al 2%. 2. Homogenizar 3. Colocar una gota de la solución en un portaobjetos y cubrirlo con un cubreobjetos. 4. Sellar los bordes del cubreobjetos con esmalte de uñas o cera de una vela. 5. Examinar al microscopio a la 1 hora, a las 2 horas y 24 horas para investigar la presencia de drepanocitos. 6. Informar el resultado de la prueba negativa o positiva según corresponda.

RESULTADOS E INTERPRETACION Este fue el resultado obtenido del espectrofotómetro con tubo 1

Aplicando los cálculos:

Se muestra como resultado un valor normal de Hb en nuestra Px ya que se encuentra dentro del rango adecuado y esto basándonos en el resultado del tubo 1 con la muestra de sangre de nuestra compañera.

EVIDENCIA FOTOGRAFICA Y OBSERVACIONES

1.- En tubo 1: Se toma la muestra sanguínea y se coloca en el tubo lila (para biometrías).

Tubo 1: Determinación de Hb Tubo 2: inducción de drepanocitos 2.- Se agito la muestra para conducir a un a hemolisis

3.- Se le coloca al tubo 2: 3 gotas de metabisulfito+ 1 gota de sangre. El metabisulfito extraerá el O2 y se producirá una hoz en el eritrocito.

4.- Se agita el tubo 2 para crear hemolisis y se sella bien.

Al tubo 1: se le coloca el reactivo de Drabkin

5.- Se coloca bajo el microscopio el resultado del tubo 2 y se observa entonces así esta muestra para su análisis. Se observa: -Que es de un Px homocigoto (ambos padres tenían el gen causante de Hb S) -Varitas de lanza -hipocromía de tres cruces con codocitos -Eritrocitos vacíos

Hemoglobina S

6.- En el tubo 1 se coloca el reactivo de Drabkin, se le agrega la muestra de sangre y se deja homogenizar durante 3 min.

7.- Después este tubo 2 es colocado en el portaobjetos con capas de esmalte para que no entre el O2

8.- El tubo 1 es enviado al espectrofotómetro, con lo cual procedimos a realizar los cálculos para determinar si se encuentra dentro del rango del VN de Hb.

Observación:

Tubo 2: Se nos presenta la muestra de una Px con Hemoglobina S, homocigótica, gen causante de Hb S de ambos padres. Se observan eritrocitos vacios, codocitos y varitas de lanza, lo cual representa a la Hb S

CONCLUSION Al hacer la práctica notamos que para determinar este volumen que existe de Hb circulante en la sangre es fácil y sencillo de obtener ya que a la hora de introducirla al espectrofotómetro prácticamente nos dice todo solo hay que sacar el resultado haciendo la operación básica que ya nombramos anteriormente. investigación rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones médicas o

legales. Las siguientes son posibles razones por las que este examen puede realizarse:

   

Acidosis láctica Anemia de células falciformes Anemia por deficiencia de hierro Embolia grasa

Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Su duración puede depender de los resultados o terminación de otros exámenes, procedimientos o tratamientos. Los exámenes pueden ser realizados inmediatamente en una emergencia o pueden ser demorados conforme una condición es tratada o monitoreada. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.

BIBLIOGRAFIAS http://aline-monserrat.blogspot.com/2012/04/practica-7-determinacion-de-la.html https://archivos.csif.es/archivos/andalucia/ensenanza/revistas/csicsif/revista/pdf/Numero_3/Valor acion%20de%20la%20hemoglobina_rosarioalorscorrederas.pdf...