Serpiente terciopelo - Resumen Microbiología PDF

Preview

Summary

Investigacion sobre veneno de serpiente de bothrops asper para analizar su proteina...

Description

Serpiente terciopelo – Bothrops asper. La terciopelo es una especie de serpiente crotalina venenosa que se encuentra en América Central y el norte de Sudamérica. Descripción Los miembros del género Bothrops se distinguen por sus cabezas anchas y aplastadas que están separadas del resto del cuerpo. Sus párpados oculsres son muy distintos. En regiones más secas, la serpiente terciopelo tiene más escamas para evitar la pérdida de agua. La serpiente terciopelo varía fenotípicamente a través de su rango geográfico. Esto ha llevado a la confusión entre esta y otras especies, especialmente Bothrops atrox, que es similar en color pero a menudo contiene tonos amarillos u óxido y manchas rectangulares o trapezoidales. La cabeza de la serpiente de terciopelo es marrón medio a oscuro o incluso negro. Puede tener chasquidos o rayas occipitales que varían de borrosas a claras, pero generalmente están ausentes. La parte inferior suele ser de color amarillo pálido. Las Bothrops Asper pueden pesar hasta 6 kg y generalmente miden de 1.2 a 1.8 m de longitud. Al igual que la mayoría de otras Bothrops, B. asper tiene diferentes patrones y colores en sus lados dorsal y ventral y también exhibe una franja postorbital. El lado ventral es amarillo, crema o gris blanquecino, con manchas oscuras (moteado) que aumenta en frecuencia hacia el extremo posterior. Terciopelos exhibe un gran dimorfismo sexual. Desde el nacimiento, los machos son notablemente más pequeños que las hembras. Las hembras tienen cuerpos gruesos y pesados y pueden alcanzar hasta 10 veces el tamaño de los machos. Los machos tienen de 161 a 216 escamas ventrales y de 57 a 81 subcaudales. Las hembras tienen 187 a 240 ventrales y 46 a 70 subcaudales. Las hembras juveniles tienen una cola marrón, mientras que los machos tienen una cola amarilla. Antes de la maduración sexual, los machos pierden por completo su punta amarilla La distribución de la serpiente terciopelo – Bothrops asper incluye la costa noroeste de Sudamérica desde Ecuador a Venezuela, Trinidad y el norte hasta México. Más específicamente, en México y América Central Bothrops asper se encuentra al norte del sur de Tamaulipas y al sur de la península sudeste de Yucatán. Reside en las tierras bajas de las costas del Atlántico de Nicaragua, Costa Rica y Panamá. Terciopelos (Bothrops asper) también se encuentran en las áreas del norte de Guatemala y Honduras.

La serpiente terciopelo prefiere niveles más altos de humedad, pero los adultos se pueden encontrar en áreas desérticas, ya que tienen menos riesgo de deshidratación que sus contrapartes juveniles. En Ecuador, Terciopelos habitan en los bosques húmedos y secos de baja montaña, así como en los bosques nubosos costeros.

Reproducción

Las Bothrops Asper pueden pesar hasta 6 kg y generalmente miden de 1.2 a 1.8 m de longitud La serpiente terciopelo es vivípara, lo que hace que el desarrollo del estado neonatal / juvenil sea interno. A diferencia de muchas víboras, no hay casos documentados de combate masculinomasculino en Bothrops asper. A menudo, las hembras se aparearán con más de un macho en una temporada de apareamiento. El apareamiento incluye una serie de movimientos del macho que luego persigue lentamente a una hembra que acepta. A menudo mueve la cabeza a su lado. La hembra detiene el movimiento y extiende su postura para aparearse. No se sabe si esta especie exhibe reproducción anual o bienal. La serpiente terciopelo es considerada la serpiente más prolífica de todas las Américas. Se reproduce estacionalmente, generalmente durante la temporada de lluvias cuando los alimentos están disponibles. Se sabe que los machos siguen a las hembras durante la temporada de apareamiento en algunas regiones. La fertilización es interna. Debido a que las serpientes de terciopelo tienen un amplio rango geográfico, el tiempo y la duración de la reproducción varían mucho. Por ejemplo, en la población atlántica de Costa Rica, Bothrops asper se aparea en marzo, pero en la región del Pacífico, se aparea de septiembre a noviembre. Esta variación continúa a través de América Central y del Sur.

Comportamiento La serpiente terciopelo es una víbora nocturna y solitaria. La actividad varía estacionalmente, la B. asper es menos activo en los meses más fríos y secos. Los terciopelos se encuentran con mayor frecuencia cerca de ríos y riberas de riachuelos,

tomando el sol durante el día y bajo cubierta forestal, listos para tender una emboscada durante la noche. La víbora también exhibe una pantalla de defensa en espiral cuando está amenazada por otra especie. Se sabe que los juveniles trepan árboles y también exhiben señuelo caudal, un uso de sus diferentes puntas de cola de colores para atraer presas. Se estima que la duración de la vida en la naturaleza es similar a la de la cautividad, que oscila entre 15 y 21 años

Alimentación Bothrops asper, debido a su gran distribución, se alimenta de una gran variedad de presas. El tamaño, la fuerza y el veneno extremadamente tóxico hacen que los terciopelos sean depredadores efectivos. En la edad adulta, se sabe que se alimentan de mamíferos, anfibios y reptiles, pero no se limitan a estos grupos. Los juveniles se alimentan de pequeños lagartos e incluso insectos grandes como Scolopendra angulata. En Costa Rica, se sabe que los adultos se alimentan de ratas, zarigüeyas y otros roedores, así como de conejos, ranas y gecos (Gonatodes albogularis). En Ecuador, principalmente se alimentan de roedores y en la isla de Trinidad, se sabe que Bothrops Asper se alimenta de todo, desde roedores y otros pequeños mamíferos, lagartos, ranas y aves, hasta cangrejos. Estas especies incluyen Didelphis marsupialis y Ninia atrata.

Veneno

Su gran tamaño y la costumbre de levantar la cabeza del suelo pueden provocar mordiscos por encima de la rodilla. Esta especie es irritable y se mueve rápidamente. También se considera que es más excitable e impredecible que B. atrox . Su gran tamaño y la costumbre de levantar la cabeza del suelo pueden provocar mordiscos por encima de la rodilla. También se ha observado que expulsa veneno a una distancia de al menos 6 pies (1,8 m) en chorros finos desde la punta de sus colmillos. Los síntomas de mordedura incluyen dolor, supuración de heridas punzantes, hinchazón local que puede aumentar hasta 36 horas, hematomas que se diseminan desde el lugar de la picadura, ampollas, entumecimiento, fiebre leve, dolor de cabeza,

sangrado de la nariz y las encías, hemoptisis , hemorragia gastrointestinal, hematuria, hipotensión, náuseas, vómitos, alteración de la conciencia y sensibilidad del bazo. En los casos no tratados, con frecuencia ocurre necrosis local y puede causar gangrena que a menudo requiere amputación. En 12 casos fatales, la causa de la muerte fue sepsis, hemorragia intracraneal, insuficiencia renal aguda con hipercalemia y acidosis metabólica y shock hemorrágico Se ha sugerido que la mordedura venenosa de B. asper fue un factor en la elección de ciertos asentamientos mayas, como Nim Li Punit , Belice, América Central, donde la densa jungla habitada por estas serpientes se utilizó como límite defensivo.

PROCEDIMIENTOS PARA LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS 4.2 MATERIALES 4.2.1 Cámara de electroforesis vertical y accesorios. 4.2.2 Micropipetas de 20, 200 y 1000 µL. 4.2.3 Vaso de precipitación de 500 mL de capacidad. 4.2.4 Flotadores para microtubos de 1,5 mL. 4.2.5 Lámina extensible de parafina. 4.2.6 Gradillas de plástico. 4.2.7 Puntas descartables de polipropileno con capacidad para 20, 200 y 1000 µL. 4.2.8 Solución de poliacrilamida al 30% (Anexo A). 4.2.9 Buffer Tris-HCL 1,5 M pH= 8,8 (Anexo A). 4.2.10 Buffer Tris-HCL 0,5M pH= 6,8 (Anexo A). 4.2.11 Dodecilsulfato de sodio (SDS) al 10% (Anexo A). 4.2.12 Persulfato de amonio (APS) al 10% recién preparado (Anexo A). 4.2.13 N,N,N',N'-Tetrametiletilendiamina (TEMED solución stock). 4.2.14 Agua bidestilada. 4.2.15 Buffer de resolución Tris-Glicina (Anexo A). 4.2.16 Butanol-agua (Anexo A).

PREPARACIÓN DE LOS GELES DE POLIACRILAMIDA 4.4.1 La electroforesis de proteínas descrito en este manual corresponde al sistema discontinuo denaturante. Es discontinuo porque está conformado por dos geles de poliacrilamida de resolución y empacamiento que presentan diferente concentración, composición y pH. Ambos geles se encuentran unidos pero limitados por una fase de separación visible al trasluz. Debido a que en estado líquido ambos geles pueden mezclarse fácilmente, deben ser preparados por separado esperando la total polimeración del primero para continuar con la polimerización del otro. El gel de empacamiento generalmente se localiza en la parte superior del sistema formando los pocillos donde se depositarán las muestras. El gel de resolución por su parte forma el cuerpo del gel por donde migrarán y se separarán las proteínas.

PREPARACIÓN DEL GEL DE RESOLUCIÓN 4.5.1 Fundamento teórico El gel de resolución es la matriz de poliacrilamida donde las moléculas de ADN o proteínas, van a migrar generando un perfil de bandas o patrón electroforético. Dicho patrón varía de acuerdo al peso molecular de cada una de las moléculas y a la concentración del gel mismo. 4.5.2 Procedimiento 4.5.2.1 Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las soluciones. 4.5.2.2 Marcar el límite hasta donde la matriz de acrilamida será vertida, trazando una línea horizontal en el vidrio con un marcador indeleble. Para saber la ubicación exacta de la línea, colocar el peine entre ambos vidrios y medir entre uno y cinco centímetros (dependiendo del tamaño de la cámara) por debajo de los dientes del peine (Figura N° 2) 4.5.2.3 Realizar la preparación del gel de resolución a una concentración de acuerdo a las necesidades, mezclando los componentes en el orden que se indica en el Anexo A. 4.5.2.4 Aproximadamente 5 mL de solución deberán ser preparados en caso de trabajar con geles pequeños de aproximadamente 8 - 10 cm de ancho por 5 - 7 cm de largo y un espesor de 0,7 - 0,8 mm. La concentración de poliacrilamida a usar dependerá de las necesidades del operador. 4.5.2.5 Una vez finalizada la preparación de la solución, añadir los catalizadores APS y TEMED uno por uno, tratando de mezclar cada reactivo de manera uniforme en todo el volumen. Figura N° 4. Sistema de electroforesis vertical ensamblado Cátodo Ánodo Buffer de electroforesis Fuente de poder Tanque de electroforesis vertical 12 Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN

MPR-CNSP-016 Instituto Nacional de Salud 4.5.2.6 Agregar un volumen de la solución de poliacrilamida entre las placas de vidrio hasta la línea trazada. Posteriormente, añadir una capa de butanol-agua (aproximadamente 100 µL) sobre la solución de poliacrilamida para evitar el ingreso de moléculas de oxígeno que retarden la polimerización. 4.5.2.7 Dejar polimerizar a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos, usando como control polimerización la solución de poliacrilamida remanente. 4.5.2.8 Una vez formado el gel, descartar la capa de butanol y lavar la parte superior del gel varias veces con agua destilada hasta eliminar completamente los restos de acrilamida no polimerizada y butanol. 4.6 PREPARACIÓN DEL GEL DE EMPACAMIENTO 4.6.1 Fundamento teórico El gel de empacamiento es la matriz de poliacrilamida que tiene como característica retener a las proteínas manteniéndolas uniformes antes que ellas migren hacia el gel de resolución. Este proceso permite mejorar la resolución de las proteínas en la electroforesis. 4.6.2 Procedimiento 4.6.2.1 Asegurarse de usar guantes durante la manipulación de las soluciones. 4.6.2.2 Mezclar los componentes del gel (Anexo A). 4.6.2.3 Una vez finalizada la preparación de la solución, agitar moderadamente sin hacer burbujas a fin de asegurar que el TEMED y el APS se distribuyan uniformemente en todo el volumen de la solución.

4.6.2.4 Agregar la poliacrilamida entre los vidrios de la cámara y sobre el gel de resolución ya polimerizado. Inmediatamente después, colocar el peine entre ambos vidrios secando con papel toalla los restos de poliacrilamida que lleguen a derramarse. 4.6.2.5 Dejar polimerizar la poliacrilamida a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos usando como control de la polimerización la solución de poliacrilamida que quedó remanente en el tubo. 4.6.2.6 Una vez formado el gel, retirar el peine cuidadosamente y lavar todos los pocillos ya formados con chorro suave de agua destilada....