TEMA 5 - APUNTES PDF

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TEMA 5: Contaminaciones en Cultivos Celulares. DETECCIÓN DE MYCOPLASMA Son bacterias que contaminan los cultivos, y son ácido y alcohol resistentes. Mycoplasma remove: para tratar las céluas infectadas por mycoplasmas, pero no siemrpe se elimina la infección. Hay que hacer pruebas de detección porque no son detectables a inspección visual. Los métodos de detección pueden ser: - Moleculares (de PCR) - Colorimétricos DETECCIÓN DE MYCOPLASMA BASADA EN EL RECEPTOR TLR2 TLR2 es un receptor de tipo Toll que está relacionado directamente con estructuras de mycoplasma, aunque por lo general los receptores Toll sean de la inmunidad innata. Tenemos células HEK-2 transfectadas con el gen que codifica para proteinas del receptor TLR2, estas células tienen también un antibiótico para que si alguna célula pierde el receptor, esta célula muera y no altere los resultados. Se cultivan en medio DMEM con normocin para asegurar que todas las células vivas estén trasnfectadas con el receptor. Si las células están infectadas por mycoplasmas, se van a unir al receptor TLR2, desencadenando una señalizacióncelular que va a dar lugar a la activación de factores de transcripción como el nfkb, se activa el gen de la proteína fosfatasa alcalina (SAP) y dará lugar a un color azulado (el medio en un principio era rosa, si se pone azul es que hay contaminación) Detección de Mycoplasma , basado en TLR2 Se produce la proteína sAP ( alkalina fosfatasa)...